[求救] Digitonin配置

看板Biotech作者 (TATA box)時間5年前 (2018/11/21 18:02), 5年前編輯推噓1(1推 0噓 33→)
留言34則, 4人參與, 6年前最新討論串1/1
各位版大好: 小的目前使用 Digitonin粉末 (Sigma-D141), 並回溶在 ddH2O 中。 由於實驗設計，無法配在 DMSO 或 EtOH 中 當初是按照別篇 paper的步驟，加熱95度10分鐘後，粉末全溶後分裝，也在暫放4度冰箱後? 我是想請問: 1.每次要使用前，都必須重新95度加熱以溶解沉澱嗎? 或是放置室溫一段時間即可 2. 凍在-20度大概可以放多久呢? 還是其實可以放4度即可? 這東西stock配起來有2ml , 我每次只會用1ul阿……是否建議分裝凍，用個兩三次就扔一管 希望有使用過的版友能分享一些心得 謝謝各位! ----- Sent from JPTT on my Sony G3125. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 114.136.253.35 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1542794558.A.1AB.html
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11/22 01:12, 5年前 , 1F
Digitonin 超難搞的，看能不能直接買 commercial 配好
11/22 01:12, 1F
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11/22 01:12, 5年前 , 2F
的 solution 吧
11/22 01:12, 2F
不過買配好的溶液，放冰箱還是一樣會沉澱吧? ※ 編輯: tynse71864 (223.137.77.51), 11/22/2018 19:32:44
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11/25 18:19, 5年前 , 3F
1、我是放到室溫使用。2、建議stock放-20°C。剛配置完就分
11/25 18:19, 3F
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11/25 18:21, 5年前 , 4F
裝，用PCR的小管子裝10~20ul。解凍過後放4°C。久未用則丟。
11/25 18:21, 4F
謝謝 ice大! 想請問你的久是一個月左右嗎?或是更短呢? 謝謝 ※ 編輯: tynse71864 (223.140.178.46), 11/25/2018 21:51:48
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12/04 03:09, 5年前 , 5F
約一到兩星期。大多是十天左右吧。
12/04 03:09, 5F
推
12/04 14:40, 5年前 , 6F
Digitonin很穩定 配5-10%放eppendorf存在4度冰箱
12/04 14:40, 6F
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12/04 14:40, 5年前 , 7F
要用前微波10-20秒看微波爐功率 比加熱融的快不用到
12/04 14:40, 7F
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12/04 14:42, 5年前 , 8F
95度就會全融了 它是固醇衍生物很穩定只怕被微生物吃
12/04 14:42, 8F
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12/04 14:44, 5年前 , 9F
我也是買了一小瓶破菌用了兩年還沒用完
12/04 14:44, 9F
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12/28 20:20, 5年前 , 10F
最近要回頭試 Digitonin，因而查到一個有趣的 protocol
12/28 20:20, 10F
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12/28 20:21, 5年前 , 11F
，這個 protocol 寫把 1g Digitonin 溶到 20 mL 水裡，
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12/28 20:21, 5年前 , 12F
加熱到 95~98 度等他完全溶解後，放到 4 度至少 2 天，
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12/28 20:22, 5年前 , 13F
之後把沉澱物過濾掉，這樣的 Digitonin 是 5% 的溶液。
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12/28 20:23, 5年前 , 14F
所以說對這個 protocol 來說，那些在 4 度沉澱出來的東
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12/28 20:23, 5年前 , 15F
西不是 Digitonin 而是雜質？
12/28 20:23, 15F
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12/30 18:05, 5年前 , 16F
x 大我好像看過你說protocol, 他好像是說市售digitoni
12/30 18:05, 16F
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12/30 18:05, 5年前 , 17F
n像是個混合物，需要回溶過濾或是再結晶析出的樣子？
12/30 18:05, 17F
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12/30 18:06, 5年前 , 18F
總之我試用2/3樓的建議，目前做 IF 染色結果還算一致
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12/30 18:06, 5年前 , 19F
，也有預期的結果
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12/30 22:06, 5年前 , 20F
Sigma 賣的兩種 digitonin 都不是純的，一個直接標明是
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12/30 22:07, 5年前 , 21F
~50% (D5628)，另一個要輸入貨號去查才知道 (D141)，我
12/30 22:07, 21F
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12/30 22:07, 5年前 , 22F
的 digitonin 是要拿來做 co-IP 的，純度對我的影響可
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12/30 22:09, 5年前 , 23F
能很大，我手上的 digitonin (D141) 這管輸入貨號去查
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12/30 22:10, 5年前 , 24F
他寫是 77.4%。我在想需不需要去測試去掉或不去掉沉澱
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12/30 22:11, 5年前 , 25F
拿來做 co-IP 的結果如何，雖然我最後是要打 MASS 找未
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12/30 22:12, 5年前 , 26F
知的 interaction protein，不過有已知的 protein 可以
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12/30 22:12, 5年前 , 27F
用來做 co-IP 成功與否以及效率的 assay
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12/30 22:13, 5年前 , 28F
話說，我的 digitonin 買來的直接加水都會先完全溶解，
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12/30 22:13, 5年前 , 29F
連加熱都不用就溶得乾乾淨淨，要在 4 度放一陣子後才會
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12/30 22:14, 5年前 , 30F
有沉澱，我還很納悶為什麼網路上都說要加熱溶解....
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12/30 22:22, 5年前 , 31F
Preparation of Water-Soluble Digitonin
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12/30 22:22, 5年前 , 32F
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01/08 01:35, 6年前 , 33F
咦D141就那2ml 包裝那管嘛！ 我加水沒溶欸……還是有9
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01/08 01:35, 6年前 , 34F
5度水加熱
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※ 編輯: tynse71864 (114.136.202.89), 03/21/2019 21:46:34
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