[求救] 關於CRISPR/Cas9

看板Biotech作者 (runthroughthetime)時間5年前 (2018/10/08 23:15), 5年前編輯推噓3(3推 0噓 23→)
留言26則, 6人參與, 5年前最新討論串1/1
各位版友大家好，下禮拜要報seminar了可是期刊實在是真的看不懂 期刊的題目是Vitamin D Switches BAF Complexes to Protect beta Cells 2018, Cell 173 , 1135–1149 圖1A就卡住了，因為我本身是醫療相關的，對於生醫的概念非常非常差 背景知識非常薄弱，這一個禮拜每天努力查詢相關知識可是都還是摸不太清楚 想請教版友的是 https://imgur.com/a/TC8ik4K 1. 這圖1A中 insulin promotor-driven GFP reporter是指用insulin promotor(是 一個蛋白質? 還是一段基因序列?)當作一個可以表現出GFP的東西，當後續的幹細胞 有表現出綠色螢光時表示有這個東西? 2. 為什麼在1A的途中最後GFP(+)的 beta-like cell會找到很多dropped out的 single guide RNAs，而在GFP(-)的beta-like cell中反而會有很豐沛的single guide RNAs? 是因為single guide RNAs本來就可以執行讓目標基因gain of funciton 以及loss of function的功能，所以讓GFP(+) beta like cell的什麼基因 loss of function嗎? 我知道好像有的版友覺得書不讀懂不應該上來問，但是我是自己真的花了一個多禮拜還是 搞不清楚這些基因工程的意義，所以上來請教版友，若有違反板規的地方也請版主刪文 沒關係，謝謝也打擾各位版友了~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 1.170.8.179 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1539011729.A.743.html
→
10/09 02:10, 5年前 , 1F
建議可以把 Figure 1 和 figure legend 放上來。
10/09 02:10, 1F
→
10/09 11:30, 5年前 , 2F
insulin promotor-driven GFP reporter是一段DNA序列
10/09 11:30, 2F
→
10/09 11:30, 5年前 , 3F
有表現insulin的細胞(如iPSC分化成b-cell後),就會促進這段
10/09 11:30, 3F
→
10/09 11:32, 5年前 , 4F
DNA序列表現GFP(發綠光)，而未分化成b-cell的,就不發光
10/09 11:32, 4F
→
10/09 11:39, 5年前 , 5F
由於CRISPR/Cas9可以透過不同的sgRNA去關閉特定基因表現
10/09 11:39, 5F
→
10/09 11:40, 5年前 , 6F
如果有個基因被關掉後，會導致iPCS無法分化成b-cell，那這
10/09 11:40, 6F
→
10/09 11:41, 5年前 , 7F
個基因的sgRNA，是不是「不該出現」在GFP+的那一群？
10/09 11:41, 7F
→
10/09 11:44, 5年前 , 8F
另外全身上下除了b-cell以外,幾乎所有細胞都不表現insulin
10/09 11:44, 8F
→
10/09 11:46, 5年前 , 9F
也就是除了b以外的細胞都不發光,故GFP-這群細胞異質性高
10/09 11:46, 9F
→
10/09 11:50, 5年前 , 10F
取出來定序的sgRNA也會均勻分布,不像GFP+會有明顯減少
10/09 11:50, 10F
→
10/09 11:51, 5年前 , 11F
我覺得應該沒有讀不懂不該問的情況,只是有些問題不寫paper
10/09 11:51, 11F
→
10/09 11:57, 5年前 , 12F
來源,或發問者的專長或程度,自然就認為基礎的問題要靠自己
10/09 11:57, 12F
※ 編輯: neven (1.170.8.179), 10/09/2018 20:04:27
推
10/10 09:12, 5年前 , 13F
個人覺得從你的文字看起來，生技的背景應該是0，如果是
10/10 09:12, 13F
→
10/10 09:12, 5年前 , 14F
想大概看懂這篇的結果，看看摘要或是討論就行了，如果
10/10 09:12, 14F
→
10/10 09:12, 5年前 , 15F
是想弄清楚他的來龍去脈和實驗設計，誒諾，可能有點難
10/10 09:12, 15F
→
10/10 09:12, 5年前 , 16F
度
10/10 09:12, 16F
推
10/10 09:31, 5年前 , 17F
原PO要報seminar這樣有點不OK, 可能要有人當面教你
10/10 09:31, 17F
→
10/10 11:01, 5年前 , 18F
To檸檬茶，我的生技背景跟知識都是0沒錯，而且大學時代
10/10 11:01, 18F
→
10/10 11:02, 5年前 , 19F
上的分子生物跟現在突飛猛進的基因編輯及技術完全跟不上
10/10 11:02, 19F
→
10/10 11:03, 5年前 , 20F
不過既然選了也只能盡力的看完他，多認識一點東西是好的
10/10 11:03, 20F
→
10/10 11:04, 5年前 , 21F
至少這一個禮拜還算享受求知的過程，因為還有幾天可以準備
10/10 11:04, 21F
→
10/10 11:05, 5年前 , 22F
所以沒有很焦慮。
10/10 11:05, 22F
→
10/10 11:06, 5年前 , 23F
To qiet:不知道有沒有人願意教我，我可以付家教費，真的
10/10 11:06, 23F
→
10/10 11:17, 5年前 , 24F
有意願的版友可以站內信，謝謝大家
10/10 11:17, 24F
推
10/10 16:33, 5年前 , 25F
你在哪？
10/10 16:33, 25F
→
10/10 19:41, 5年前 , 26F
我在台中喔
10/10 19:41, 26F
‣ 更多 neven 的文章
文章代碼(AID): #1RktIHT3 (Biotech)