[求救] Phage amplification消失

看板Biotech作者時間7年前 (2018/07/22 23:41), 編輯推噓2(201)
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各位版友好,我目前遇到一個問題。實驗室需要將phage放大到10的11次方,但嘗試多次仍無法達到如此高的titer。以下是多次的實驗方法,請各位幫我看看哪裡可以改進QQ (1)10ml菌液搖菌至OD600=0.5-1,加入1ml 10的九次方的phage,共培養8小時,shaking 150 rpm。最終以1ml的sm buffer回溶,得到titer是2*10的九次方 (2)1ml菌液搖菌至OD600=0.5-1,加入100ul 10的八次方的phage,共培養8小時,shking 150 rpm。離心後得到的phage液再加入10ml菌液中共培養8小時。再離心後得到的phage液加入200ml的菌液中,共培養8小時。也就是逐次放大的概念,最後以1cc sm buffer回溶。 這種方式有成功過一次,但之後就再也沒成功過了,之後得到的titer也是落在10的九次方左右。 之後還試了不同體積的菌液與不同titer的phage共培養的組合,但是做出來也都差不多10的九次方。 因此希望有做過相關實驗的版友們能幫幫忙QQ 感謝各位! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.71.145 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1532274079.A.8DC.html

07/23 15:40, , 1F
我是都inoculate 10ml 4hr後直接加LB到200ml在放4hr這
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樣stepwise 放大
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然後inoculation 起始OD 0.8-1
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文章代碼(AID): #1RLAMVZS (Biotech)