[求救] HepG2油紅染色已刪文

看板Biotech作者 (零)時間5年前 (2018/07/15 16:42), 編輯推噓3(3推 0噓 12→)
留言15則, 5人參與, 5年前最新討論串1/1
請問有人做過HepG2的油紅染色嗎 最後再用異丙醇回溶測吸光的，目前遇到一個大問題 就是細胞很常染完後中間細胞很多 都不見了，之後我們發現可能是沒乾燥的關係，因為用甲醛固定完後細胞有浮起來的樣子 ，所以用甲醛固定完後我們會放操作台乾燥30分鐘在繼續做，乾燥完有貼回去的感覺，細 胞是有比之前還多 但還是有大部分well中間細胞消失 但在染油紅之前細胞都還在（我種在24well） 求也做過油紅染色的大大可以跟我討論一下，做了好一陣子了QQ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.127.19.143 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1531644154.A.F1A.html
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07/15 21:43, 5年前 , 1F
甲醛應該不是直接往細胞沖吧？
07/15 21:43, 1F
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07/16 01:34, 5年前 , 2F
我是用10%甲醛（用pbs配） 然後加進去well反應10分鐘吸出
07/16 01:34, 2F
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07/16 01:34, 5年前 , 3F
再放操作台乾燥30分鐘
07/16 01:34, 3F
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07/16 01:35, 5年前 , 4F
現在在考慮是不是乾燥不完全 所以想說改放60度烘箱1小時
07/16 01:35, 4F
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07/16 01:35, 5年前 , 5F
看看？
07/16 01:35, 5F
推
07/16 07:45, 5年前 , 6F
固定時間拉到20分鐘看看？ 然後不要乾燥 用pbs洗就好
07/16 07:45, 6F
推
07/17 08:58, 5年前 , 7F
我覺得是在cell culture時就有問題 fixation才會容易飄
07/17 08:58, 7F
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07/17 08:58, 5年前 , 8F
起來 建議注意一下是否細胞太多養過頭了
07/17 08:58, 8F
推
07/27 08:51, 5年前 , 9F
我做3t3l1oilred，是以10%甲醛PBS固定30min與4度冰箱，
07/27 08:51, 9F
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07/27 08:51, 5年前 , 10F
加入時手打平從well側面很慢很慢加入，就不會中間細胞被
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07/27 08:51, 5年前 , 11F
衝掉
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07/27 08:57, 5年前 , 12F
24 well養hepg2或是3t3時很常見從well中間加藥物或是樣
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07/27 08:57, 5年前 , 13F
品，可能造成well中間細胞脆弱,造成甲醛固定時容易飄，
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07/27 08:57, 5年前 , 14F
建議先讓medium與藥物混合再加入well，後期比較不會產生
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07/27 08:57, 5年前 , 15F
上述問題
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