[求救] 切膠純化後還是有雜band
大家好
現在我在用pfu pcr擴增一個片段。用的酵素是Agilent的PfuUltra II Fusion HotStart
DNA Polymerase；template是之前建構好的plasmid，每一次下的濃度約700ng/ul；prime
r長度是60mer(之前是拿來建構plasmid用的，所以有點長)。pcr後跑膠除了主要band(137
8bp)外，在2.5～3k的地方出現了不明顯的雜band，之後切膠純化主要band後再跑膠確認
還是有雜band。
為了除去雜band，我試著把pcr annealing溫度提高、extension秒數縮短讓它最大只能做
到2k，但都不行。
也有把水當template來跑跑看，結果是什麼band都沒有。
想請問各位這是發生什麼事了？有沒有方法能除去雜band呢？
感謝各位
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