[求救] 原核表現蛋白誘導 溶解度

看板Biotech作者 (三途河的擺渡人)時間6年前 (2018/03/26 17:14), 編輯推噓5(5推 0噓 12→)
留言17則, 4人參與, 6年前最新討論串1/1
大家好 小弟之前參考了很多製造可溶蛋白的方法 比如用低濃度IPTG(0.1uM) 搖慢一點(50rpm) 低溫隔夜 (16度) 結果用french press 處理後 跑SDS PAGE 上清液產物一樣不多 破完菌的pellet 用8M urea 暴力解也溶不掉 只有在加2-Me跟buffer 煮沸才有辦法讓他溶解 電泳結果最多的就是那塊無解pellet 請問這是我破菌不完全還是說他注定就不可溶? (正在做的是fusion protein 性質很難捉摸) 大概是這樣 感謝各位 ----- Sent from JPTT on my LGE LG-H815. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.120.242.1 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1522055656.A.8BA.html
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03/26 19:27, 6年前 , 1F
顯微鏡看看你的汁有沒有破乾淨啊 然後你的protein跟fu
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sion分別是什麼？
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真的是0.1uM沒打錯齁
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推
03/26 20:13, 6年前 , 4F
Urea溶不掉是金剛護體嗎XD 搖久一點呢?
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推
03/26 20:15, 6年前 , 5F
另外, 改用GST fusion通常可以改善溶解度, 可以試試
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03/27 12:43, 6年前 , 6F
打錯了 是mM 抱歉
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03/27 12:43, 6年前 , 7F
蛋白是cytokine fusion的東西教授說不可透露
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03/27 12:45, 6年前 , 8F
基本上我們實驗室做的蛋白破完用urea溶個一小時都還
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是會有一堆渣渣在漂… 唯一的辦法就是french press
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03/27 12:45, 6年前 , 10F
再打爆一次 囧
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推
03/27 17:03, 6年前 , 11F
還有渣渣是正常的, 主要是Urea上清是否有蛋白質
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03/27 17:06, 6年前 , 12F
我induction有時候會用到0.05甚至0.01mM 可以把一些
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03/27 17:06, 6年前 , 13F
太好表現的水溶性小蛋白推回soluble
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推
04/06 20:38, 6年前 , 14F
考慮換表現菌株，例如star系列1-5，會表現chaperones ，
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04/06 20:38, 6年前 , 15F
幫助蛋白質溶解。
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推
04/06 20:39, 6年前 , 16F
有些蛋白質真的無法用細菌表現，可能要用到其他系統，
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04/06 20:39, 6年前 , 17F
比如昆蟲細胞。
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