[求救] 蛋白質gel用commassie blue沒染出東西

看板Biotech作者 (欣承男孩)時間6年前 (2018/01/24 11:31), 編輯推噓2(2推 0噓 17→)
留言19則, 7人參與, 6年前最新討論串1/1
各位大大們好 小弟最近在做蛋白質分析的實驗 初步要先使用SDS-PAGE電泳觀察分子量的分佈 我先做好蛋白質的定量後開始跑電泳 濃度約位在500ug/ml上下 沒個well我大約loading 10ul 等到差不多都跑開後 用coomassie blue R250染色約30分鐘 之後開始用退色液退色 我發現 我的膠片完全沒有染出任何的蛋白質啊!!!!! 有大大們了解可能的原因在哪嗎？？？ 理論上我濃度測出來的量應該要可以在膠片上看的到染色吧!?!? 蛋白質也95度加熱過了 還是sample的酸鹼值會去影響跑電泳嗎？？？ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 117.19.152.66 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1516764699.A.9EC.html
→
01/24 11:57, 6年前 , 1F
你的蛋白來源? 另外5ug沒有很多吧
01/24 11:57, 1F
→
01/24 12:57, 6年前 , 2F
每個well,濃度,分子量分布,這些字加起來就不像跑單一蛋白
01/24 12:57, 2F
→
01/24 13:01, 6年前 , 3F
理論上是要用marker,而且要先知道R250 sensitivity
01/24 13:01, 3F
→
01/24 13:43, 6年前 , 4F
loading量過少，至少加到20ug
01/24 13:43, 4F
→
01/24 18:57, 6年前 , 5F
marker有染到嗎? 同一瓶R250最近有人染過嗎?
01/24 18:57, 5F
→
01/24 19:51, 6年前 , 6F
loading個梯度吧,然後拿個BSA當正控制組檢查試劑
01/24 19:51, 6F
→
01/24 19:51, 6年前 , 7F
當然能問實驗室的人就問,那樣比較快
01/24 19:51, 7F
→
01/25 04:07, 6年前 , 8F
你的蛋白來源跟測的方法？每種方法都有不喜歡的污染
01/25 04:07, 8F
→
01/25 04:07, 6年前 , 9F
物
01/25 04:07, 9F
→
01/25 12:23, 6年前 , 10F
我們是想把頭髮裡的蛋白質萃出來 萃取中會加入H2O2
01/25 12:23, 10F
→
01/25 12:23, 6年前 , 11F
當作氧化劑來斷雙硫鍵 但萃取後雙氧水不知怎麼去除
01/25 12:23, 11F
→
01/25 12:23, 6年前 , 12F
老闆就叫我先跑電泳看看 跑的時候有用BSA當control
01/25 12:23, 12F
→
01/25 12:23, 6年前 , 13F
BSA有染出來 但我要看的蛋白質沒有
01/25 12:23, 13F
推
01/25 19:02, 6年前 , 14F
那就是沒有萃出來啊 你的protein quantitation method
01/25 19:02, 14F
→
01/25 19:02, 6年前 , 15F
大概不喜歡h2o2
01/25 19:02, 15F
→
01/25 22:23, 6年前 , 16F
有種瞎子摸象的無奈....
01/25 22:23, 16F
→
01/26 15:29, 6年前 , 17F
可是測吸光的結果濃度是有的欸
01/26 15:29, 17F
推
01/26 19:55, 6年前 , 18F
你測吸光的kit能夠承受該濃度的 H2o2嗎 如果不行則該
01/26 19:55, 18F
→
01/26 19:55, 6年前 , 19F
數值與實際會有出入
01/26 19:55, 19F
‣ 更多 shinchenboy 的文章
文章代碼(AID): #1QP_uRdi (Biotech)