[求救] 脂肪酸分析問題

看板Biotech作者jacky781 (葛樂)時間6年前 (2017/12/20 16:31)推噓4(4推 0噓 7→)

留言11則, 3人參與討論串1/1

本人在實驗上遇到很大的問題,是關於脂肪酸分析的部分. 先簡單說明一下我們實驗室採用的方法: 內容主要是測取動物組織(主要是腦部)各中脂肪酸的百分比含量,採用的方法是 Bligh and Dyer method, 第一天會先使用Methanol : Chloroform=2:1的溶劑來磨碎組織以進行脂肪酸萃取並去除掉蛋白質等部分,第二天加1.8% NaCl離心取下層並用氮氣吹乾後, 會添加Methanol : Dichloromethane=3:1和acetyl chloride(催化劑),水浴1小時以進行甲基化的步驟,水浴完等樣品回到室溫後再添加K2CO3(中和掉催化劑)和hexane後離心, 最後取上層的hexane再以氮氣吹乾,並用少量的hexane回溶,分裝到小瓶後上機. 我們實驗室用的是GC-FID, 採用的設定皆可讓我們要分析的脂肪酸甲酯(FAME)順利分離, 而DHA是我實驗的重點. 我現在遇到最大的問題就是我不管怎麼做DHA的百分比就是偏高,前人和同時期實驗室人員做的都是較合理的狀況(因為是用peak area來算百分比,所以照理來說我實驗結果的peak area每個都比別人做的低的話,DHA的area也是要低,但DHA就是和其他脂肪酸不一樣, 反而比別人的高,這就造成我的DHA百分比暴增),這問題已經困擾我很久了,和老師討論後也找不出問題點到底在哪? 這種問題還是本實驗室第一次遇到的,同樣的sample重複做結果也沒比較好,想請問這裡是否有脂肪酸分析大師有沒有什麼其他建議呢? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.121.119 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1513758712.A.231.html ※ 編輯: jacky781 (140.112.121.119), 12/20/2017 16:32:37 ※ 編輯: jacky781 (140.112.121.119), 12/20/2017 16:33:30 ※ 編輯: jacky781 (140.112.121.119), 12/20/2017 16:33:50 ※ 編輯: jacky781 (140.112.121.119), 12/20/2017 16:34:07

推

leptoneta

12/20 19:07, 6年前 , 1^F

12/20 19:07, 1^F

推

as862437

12/21 01:12, 6年前 , 2^F

12/21 01:12, 2^F

→

as862437

12/21 01:12, 6年前 , 3^F

12/21 01:12, 3^F