[求救] transfection前步驟

看板Biotech作者 (boson)時間6年前 (2017/11/03 18:31), 6年前編輯推噓9(9推 0噓 23→)
留言32則, 8人參與, 6年前最新討論串1/1
最近在做transfection 養的細胞是A549 先把120000顆細胞種入24well細胞盤 並用有抗生素的培養基培養 在24小時後換成沒有抗生素的medium 並放回去incubator 30分鐘 這時候去配transfection reagent 再換medium前看細胞是滿盤 但incubate 30分鐘後看細胞都浮起來了 想問幾個問題 1.為什麼細胞會浮起來？ 2.前面120000顆細胞會太多嗎？ 3.培養基要換成沒有抗生素的嗎？ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 49.214.198.116 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1509705098.A.1CA.html
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11/03 21:26, 6年前 , 1F
你用那一種方法transfevtion?
11/03 21:26, 1F
推
11/03 22:53, 6年前 , 2F
呃...你的狀況似乎跟transfection無關。只是細胞種滿之後
11/03 22:53, 2F
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11/03 22:53, 6年前 , 3F
換成無抗生素medium就飄起來了？
11/03 22:53, 3F
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11/03 22:54, 6年前 , 4F
我猜1.你的細胞不健康，A549很能貼的 2.你的24well有問題
11/03 22:54, 4F
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11/03 22:55, 6年前 , 5F
3.可能換medium的時候直接往細胞大力噴，神仙難救
11/03 22:55, 5F
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11/03 22:55, 6年前 , 6F
檢查方法是：換完medium馬上看細胞有無飄起來，才知道是
11/03 22:55, 6F
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11/03 22:56, 6年前 , 7F
技術或耗材問題
11/03 22:56, 7F
可是我沒有朝細胞噴，頂多後面無力稍微滴幾滴下去…24well有問題是什麼意思？ ※ 編輯: boy12345761 (49.214.198.116), 11/03/2017 23:20:51
推
11/04 00:30, 6年前 , 8F
你在換完的當下有沒有看是否被沖起來?
11/04 00:30, 8F
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11/04 00:30, 6年前 , 9F
有不少細胞株血清都不是活著的必須條件
11/04 00:30, 9F
呃 請問這句話是什麼意思？
推
11/04 01:16, 6年前 , 10F
1.你的無抗生素medium有問題? A549並不容易被沖起來
11/04 01:16, 10F
我也不確定…但這兩天有其他人做過有成功
推
11/04 01:20, 6年前 , 11F
2. 這你可以自己觀察seeding多少隔天會到7-8成滿
11/04 01:20, 11F
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11/04 01:20, 6年前 , 12F
以A549來說應該是有點多
11/04 01:20, 12F
所以不該是剛好滿盤的時候轉染嗎？
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11/04 01:22, 6年前 , 13F
3.通常reagent protocol都說建議不要加
11/04 01:22, 13F
那加了還是可以做囉？
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11/04 15:43, 6年前 , 14F
24well表面會經過類似靜電處理，讓細胞容易貼附。這也是
11/04 15:43, 14F
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11/04 15:43, 6年前 , 15F
一般Agar plate與Cell culture plate的不同
11/04 15:43, 15F
推
11/04 20:38, 6年前 , 16F
想請問DNA的總量？
11/04 20:38, 16F
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11/07 02:07, 6年前 , 17F
還沒加DNA就飄起來了 不是transfection reagents的問題
11/07 02:07, 17F
推
11/07 16:29, 6年前 , 18F
感覺是沒抗生素的那罐怪怪的啊
11/07 16:29, 18F
可是大家都用那罐欸，同時期有三個人在做transfection
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11/07 16:29, 6年前 , 19F
重配或換罐?
11/07 16:29, 19F
感謝大家，目前老師推測是細胞太滿不健康，要我再做一次，這次如果一樣狀況，再上來 求救QQ ※ 編輯: boy12345761 (49.217.213.79), 11/08/2017 21:10:09
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11/08 21:40, 6年前 , 20F
只給"細胞太滿不健康,要我再做一次"建議的話,內容太薄弱了
11/08 21:40, 20F
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11/08 21:41, 6年前 , 21F
萬一遇到相同狀況,應該是請老師出來面對才是
11/08 21:41, 21F
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11/08 21:41, 6年前 , 22F
至少要釐清,是12萬顆太多?還是種的數量超過12萬顆太多?
11/08 21:41, 22F
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11/08 21:43, 6年前 , 23F
而不是單純重做,才能在以後知道該怎麼調整
11/08 21:43, 23F
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11/08 21:45, 6年前 , 24F
另外,無抗生素的medium是?跟原本的medium只是抗生素差異?
11/08 21:45, 24F
嗯嗯 只有差在沒有抗生素
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11/08 21:47, 6年前 , 25F
以及你這裡是描述"大家共用",這等同大家都同樣做A549嗎？
11/08 21:47, 25F
是的，都在做A549
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11/08 21:52, 6年前 , 26F
單純從回應假設你跟大家所有的都一樣,的確可歸咎細胞太多
11/08 21:52, 26F
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11/08 21:55, 6年前 , 27F
可是從回應描述的方式,卻又不是那麼的肯定
11/08 21:55, 27F
推
11/09 00:04, 6年前 , 28F
對了，我24well種五萬顆，給你參考
11/09 00:04, 28F
推
11/09 00:19, 6年前 , 29F
我看錯了，把換成無抗生素看成無血清......本以為
11/09 00:19, 29F
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11/09 00:19, 6年前 , 30F
你懷疑是無血清導致細胞懸浮
11/09 00:19, 30F
推
11/10 23:58, 6年前 , 31F
昨天看了一下 12w顆好像是12well transfect種的數量？
11/10 23:58, 31F
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11/10 23:58, 6年前 , 32F
搞不好真的太滿一沖就掉
11/10 23:58, 32F
這次做的結果沒有浮起來的現象，而東西都是一樣的管子與細胞都12萬顆，老師跟我推測 可能我在卡細胞到24well時就已經太滿，所以細胞本身太小顆不健康，所以到24well細胞 也不健康，才容易浮起來，這樣的推測我有點覺得奇怪，可是我還是相信了0.0 ※ 編輯: boy12345761 (101.9.162.119), 11/15/2017 14:20:13
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