[求救] H1299 養Sphere都會貼盤

看板Biotech作者 (DrunkenBlue)時間6年前 (2017/10/29 00:39), 6年前編輯推噓8(8推 0噓 7→)
留言15則, 11人參與, 6年前最新討論串1/1
各位好 今年剛升碩一進實驗室 最近老闆要我養H1299的Sphere去做後續的實驗 因為以前也有學長姊用過這個細胞株養sphere所以我也依照他們的protocol操作 但是試了三四次總是貼盤 以下是我的操作步驟 希望大家能提供我一些可能我沒注意到的事情或著可以改進的線索 1.Parental cell以Trypsin打下後以Complete culture medium中和離心 2.將medium去乾淨後以1 ml PBS resuspend後再離心 3.去除PBS後以Serum free sphere medium resuspend後以1*10^4/2ml/well種進6 well 4.之後每隔4天補sphere medium 500ul/well 但是通常在種下去的4天後 也就是準備第一次補medium時用顯微鏡先確認狀況 就發現有滿多細胞已經貼盤了 並且漂著的細胞數量變得滿少的 有試過改變一些步驟 包括：多用PBS wash一次、 不以PBS wash，而是以sphere medium wash一次, 離心去除再加sphere medium 希望有人能夠分享一點成功的經驗和撇步 一直失敗很苦惱..... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 1.161.63.138 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1509208787.A.F1D.html
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10/29 00:47, 6年前 , 1F
你用的是 for cell culture 的 6-well 嗎？換成 petri
10/29 00:47, 1F
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10/29 00:47, 6年前 , 2F
試試看？
10/29 00:47, 2F
不好意思 petri 是指那種6cm一般養細胞的plate嗎? 因為我們實驗室養sphere都是用6 well 之後收了做qPCR或Western 我們實驗室的6 well 好像就只有兩種 一種是low attachment 一種是一般的 我會再去看看...
推
10/29 01:01, 6年前 , 3F
換成non-treated well dish試試看
10/29 01:01, 3F
我們實驗室的6 well好像是non-treated的了....
推
10/29 01:37, 6年前 , 4F
請教一下養sphere是什麼意思? 純粹好奇> <
10/29 01:37, 4F
cancer cell如果有CSC的特性的話 可以從一顆細胞分裂出其他細胞聚集成一個微球體的型態 用這種培養的方式來篩選出CSC(不知道有沒有歪掉 請幫忙補充XD)
推
10/29 01:45, 6年前 , 5F
plate有用對? 要用low-attachment plate這一類的吧
10/29 01:45, 5F
plate應該是沒有用錯... 我們實驗室確實是有low-attachment的plate 但是是給其他種細胞用的 因為之前學長姐也是用一般的6 well就養的出來了所以我也沒用那個.... ※ 編輯: steve42125 (1.169.90.204), 10/29/2017 16:29:55 ※ 編輯: steve42125 (1.169.90.204), 10/29/2017 16:41:16
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10/29 16:40, 6年前 , 6F
如果以前的學長姊成功養過,直接去尋求解決比較有效
10/29 16:40, 6F
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10/29 16:40, 6年前 , 7F
不過通常會發問可能是學長姊不在lab,protocol就不能盡信了
10/29 16:40, 7F
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10/29 16:43, 6年前 , 8F
上面說的就是看著low_attached不用這部分
10/29 16:43, 8F
了解.... 或許我可以考慮直接找老師討論看看 謝謝你... ※ 編輯: steve42125 (1.169.90.204), 10/29/2017 17:23:35
推
10/30 20:29, 6年前 , 9F
不用low attach養出來的 我覺得比較像是長太滿成球的
10/30 20:29, 9F
推
11/03 12:59, 6年前 , 10F
我們之前用ultra low dish養得出來或許你們也可以試試看
11/03 12:59, 10F
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11/06 22:55, 6年前 , 11F
Greiner,BD, Corning 這些大牌子 都有這些特殊盤 問問價格
11/06 22:55, 11F
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11/10 00:56, 6年前 , 12F
這些特殊盤都蠻貴的，不彷自己coating poly-HEMA 試試
11/10 00:56, 12F
推
11/14 07:11, 6年前 , 13F
自己co的效果都不好，買commerical 的比較方便，至少省
11/14 07:11, 13F
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11/14 07:11, 6年前 , 14F
時省麻煩
11/14 07:11, 14F
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11/19 21:21, 6年前 , 15F
細胞有養歪嗎？重新解凍新的一批試試看？
11/19 21:21, 15F
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