[求救] Pichia 的培養基混濁
第一次發問 請各位鞭
現在正在使用甘油代謝路徑的噬甲醇酵母菌做蛋白質培養
培養基是BYPG / BMG
分別材料是
BYPG
yeast ex 5g
pepton 10g
glycerol 10ml
phosphate buffer ph6.0 50ml
誘導培養基
10x YNB(YNB + ammonia sulfate)
phosphate buffer ph6.0 50ml
500x biotin 1ml
10ml. glycerol
甘油都是分開滅 biotin等冷了加
但是不知道是什麼樣的問題 冷卻之後都會沉澱東西出來 上顯微鏡看起來不像菌
起初以為是甘油高溫滅菌有問題 就用.22 過濾 還是會有沉澱析出
以前都誘導的出東西 現在都誘導不出來
請大神開示m(_ _)m
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※ 編輯: jazzinfuture (180.217.134.31), 09/23/2017 01:20:53
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09/29 10:30, , 2F
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表現的蛋白質都不變
YNB 1.7g + ammonium sulfate 5g 和 phosphate buffer 丟一起滅菌 甘油另外跟水混合滅
菌 冷卻之後倒一起混合這樣
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10/02 12:09, , 3F
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啊哈哈 推文追蹤沒追到大大回覆
因為前人是遵照expression kit 的說明在走 後面條件也都有找好
是怕菌的代謝路徑走到glucogenpath 就不能行誘導(說明書有原因)
去年學長在誘導的時候都有誘導出來
今年初我做兩輪都有東西 不過活性慢慢的減少 就覺得大事不妙然後開始除錯
菌長不長的好應該不是問題
因為要誘導的條件OD600>=60
※ 編輯: jazzinfuture (180.217.170.154), 10/10/2017 02:46:34