[求救] 24well 細胞越種越少

看板Biotech作者 (77823)時間6年前 (2017/09/05 23:50), 編輯推噓2(2推 0噓 18→)
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想請教版上各位學長姐們 我是實驗室新手 每次種24well 時細胞都會越種越少 步驟如下： 1.將細胞用trypsin，離心再加入1cc medium，後去數細胞 2.種在24well，每1well 30000顆細胞 3.會把算好的細胞數加到內含25cc medium的tube 4.1 well加1cc 我試過用auto pipet 跟 pipet，但每次種24 well完後做mtt時，最後幾格(大約8格左右)的well讀出來的od值都會下降很多 連control 那格都下降很多，所以排除是加藥的問題 想知道這個問題該如何解決，謝謝!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 114.41.127.44 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1504626624.A.B38.html
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09/05 23:53, , 1F
細胞沉澱很快，每次在加都要混勻，不然會越加濃度越低
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我每次吸6cc，都會用auto pipet再pipetting，然後再吸6cc
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我會猜是你藥物處理有換到medium,較後面處理的細胞乾死掉
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如果是分的數量差異,MTT之前就看出來了,不必測OD才發現
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另外24well用到0.5ml就好,液面太高,對生長也沒好處
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!!!!原來是這樣，會再修正我的做法的，感謝B大的幫忙
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推
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綜合上面的建議加一點我的做法：細胞混好在tube之後，每
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加完一盤整個tube搖一下混勻，然後再加下一盤，前提是單
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手開關蓋要練好、tube要絕對乾淨
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方便說是什麼細胞嗎？
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因為在練習階段，所以都是學長姐們的細胞，種過3種不同的
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細胞，但結果都是細胞數越來越少
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推
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種細胞後 做實驗前 都養成看顯微鏡的習慣比較好
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24 well應該還可以透過日光燈看細胞密度 不過前提
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種得要夠勻
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做完都會看顯微鏡檢查 +1
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而且24很難搖勻哈哈
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嗯嗯會再試試看的!!!!謝謝各位幫忙
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24well我都用1ml耶？一方面避免蒸散的影響，也避免phase
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contract中間旁邊差異太大。
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