[求救] ELISA 結果相反

看板Biotech作者pring (pring)時間6年前 (2017/08/01 23:26)推噓1(1推 0噓 3→)

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最近在做ELISA 出現了陽性血清陰性陰性血清陽性的結果（陽性血清為之前攻病毒所得來的所以非常確定它是陽性；陰性為同一隻動物攻毒前的所搜集的血清）我做的方式為 (1) coating三種不同的蛋白（一樣的濃度 2ug/cc) 4度C overnight 自己純化的病毒蛋白A、自己純化的病毒蛋白B、濃縮全病毒兩者純化的蛋白都是用HEK細胞所表現的， A蛋白為soluble protein 取其上清液做純化 B蛋白為membrane 取其細胞並用lysis buffer 過filter後純化純化方式也都一樣使用使用resin (TALON Superflow）binding 透過高濃度的imidazole elute蛋白出來 (2)blocking 1hr, RT (2)血清稀釋的倍數(一抗）也都一樣 1hr, RT (3)二抗稀釋的倍數也一樣 1hr, RT (4)呈色劑也是一樣的條件自己純化病毒蛋白A 與濃縮全病毒的結果為正常但是自己純化病毒蛋白B 卻出現了相反的結果想請問大家有相同的經驗過嗎？或是我該做什麼樣的調整? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.231.135 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1501601181.A.34C.html ※ 編輯: pring (140.112.231.135), 08/01/2017 23:34:32 ※ 編輯: pring (140.112.231.135), 08/01/2017 23:46:53

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lail

08/02 00:44, , 1^F

08/02 00:44, 1^F

pring:重復做了很多次也試過不同的陰性及陽性血清 ※ 編輯: pring (140.112.231.135), 08/02/2017 01:28:22

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Ianthegood

08/02 06:01, , 2^F

08/02 06:01, 2^F

推

joseph103331

08/02 16:13, , 3^F