[方法] tricine gel

看板Biotech作者 (阿亮)時間7年前 (2017/06/01 18:32), 編輯推噓4(4推 0噓 24→)
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我的實驗是想要跑出Trichomonas vaginalis中六個isoform 之rubrerythrin蛋白，大小 分別是21kDa,19kDa,22.1kDa,23kDa,22.2kDa ，老師說可以跑tricine-gel這種膠來分出 各個isoform， 請問大家有跑過這種要分出分子量相近的實驗嗎？，想要清楚配方以及要 注意的細節 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 101.10.37.104 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1496313146.A.186.html
推
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只有1D可能分不太出來吧 連SEC都會overlapping 的大
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小 不考慮2D嗎
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推
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15%膠 60V慢慢跑試看看 之前是分15-19kDa 4個isoform
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sec本來解析度就不是太高啊 可能要跑capillary?
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推
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我的蛋白(~16-19kda)有4個isoform, 在 sds page跟 tri
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cine gel結果都分的出來;同1F跑15%gel 跑膠速度正
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常
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感謝大家 我試試看
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請問一下 為什麼感覺兩個sample跑的速度不一樣 然後到
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下半部的時候 marker的band也變的有點歪斜 我這個膠是
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不是一層8% 第二層10% 第三層16.5%的tricine gel跑的(
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老師要我這樣做)
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推
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三層應該不是問題 ; 我記得 tricine gel的sanple體積
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不能太大 (一般建議10以下)
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下方 Mr歪代表你旁邊 land該處蛋白太多了 擠到隔壁
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的跑道
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我為了避免互相擠壓 分開load了，但跑出的結果還是分不
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我為了避免互相擠壓 分開load了，但跑出的結果還是分不
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開也，頂多就只有一條band，老師說他以前做實驗連50Da
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都分的開，我怎麼分不開@@
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老師是跟我說第一層跑10mA,第二層15mA,第三層25mA，這
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樣條件正確嗎？
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樓上t大你當初是怎麼跑的呢？，可以跟你要詳細protocol
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電壓電流
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時間... 緩衝液配方等等另外老闆一直說要用Horfer SE28
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0電泳設備跑才分的開 你也是用這設備跑的嗎？ 快畢不了
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業了 希望趕快跑出來
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