[求救] PVDF membrane可否這樣保存
大家好
想請問transfer過後還未加一抗的PVDF membrane是否可以先保存於4度1x TBST (不知是否需要先做blocking)
然後隔天再加一抗(先blocking)4度o/n
因為我的抗體隔天才會來,想先看別的位置的protein的表現
而我的抗體要看磷酸化的protein,聽說磷酸化的protein不穩定
所以不知如果可以這樣做,是否會影響membrane上的磷酸化protein?
查版上好像是ECL後如果要保存會烘乾,要用前先加methanol再一抗二抗
另外想問因為我會連續幾天跑Western,然後這抗體會用很多次
不知是否可以第一天4度搖o/n的稀釋抗體吸起來先保留在4度
然後給第二天的Western搖4度o/n
然後給第二天的Western搖4度o/n
然後給第二天的Western搖4度o/n
因為data sheet建議稀釋倍率是1:1000,不知這樣效果是否會減弱很多?
又學長建議我4度o/n搖後隔天室溫再搖1小時來增強binding
如果這樣做是否就不建議用我上述提到的reuse方法?
先謝謝大家了
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 111.248.116.194
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※ 編輯: MLSHBen (111.248.116.194), 04/25/2017 04:06:31
※ 編輯: MLSHBen (111.248.116.194), 04/25/2017 04:07:04
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所以真要這樣做的話4度5% BSA blocking o/n其實是OK的?
※ 編輯: MLSHBen (140.112.4.209), 04/25/2017 13:04:18
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謝謝大家的建議
可以問一下收磷酸化蛋白的樣品需要特別注意甚麼嗎?(雖然有點離題了)
我的RIPA buffer裡是有含1% protease inhibitor和1% phosphotase inhibitor
我的RIPA buffer裡是有含1% protease inhibitor和1% phosphotase inhibitor
sample凍-80,但為了不增加freeze/thaw次數有考慮想要分裝,然後用sample buffer凍-20 (有聽說protein用sample buffer處理過後凍-20是OK的)
謝謝
※ 編輯: MLSHBen (111.248.116.194), 04/26/2017 00:54:48
※ 編輯: MLSHBen (223.137.125.118), 04/26/2017 03:33:12
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