[討論] PRIMER斷裂

看板Biotech作者 (rt87687)時間7年前 (2017/04/19 20:07), 7年前編輯推噓4(4推 0噓 17→)
留言21則, 10人參與, 最新討論串1/1
如題 最近做計畫 設計primer 想找SNP的溫度 在操作的時候送來的primer有被摔到 想請問primer會斷掉嗎＠＠ 斷掉後會有什麼樣的結果？ 今天跑完PCR後結果是大量的雜band 但是因為我們調的溫度也不是廠商推薦溫度 所以懷疑也可能只是溫度沒調對 或是說會是primer加太多嗎？ 謝謝！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.176.97.150 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1492603655.A.58C.html
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04/19 20:14, , 1F
tube摔到不會讓prmer斷掉,就像溶水後vortex混合也不會碎掉
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什麼叫做SNP的溫度
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我們是測定特定基因的SNP最佳反應的溫度
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所以是除非vortex太強烈 不然應該不會是斷掉導致雜band
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嗎？
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primer多大？不過基本上primer很難斷裂吧
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20mer
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推
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雜band多跟PCR設定的條件有關,primer太高也有可能(可是
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沒有寫如何配,也沒人知道是不是真的primer加太多)
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補上配置的材料 SNP：HER2 rs1058808 總共8個熱血 DNA 1ul Master Mix 10ul Primer F/R 1ul ddH2O 7ul Total 20ul 溫度條件（Gradient）：52-60℃ ※ 編輯: rt87687 (180.176.97.150), 04/19/2017 20:31:02
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寫反映條件時重要的是最終濃度而不是加的體積
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熱血？全血？ 這樣還能要求很清晰無瑕的band嗎？
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sample量/內容沒寫 primer量沒寫 program沒寫 target
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size多大沒寫 哪個polymerase沒寫 是當板友都會通靈
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逆
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推
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請樓下觀落陰去看一下
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推
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哦哦哦 我感應到了，他的primer告訴我他好痛XD
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推
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如果血液樣品沒經過前處理 直接做 雜訊很多很正常
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觀落陰得知primer斷腿了 看到DNA就想黏
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Sorry沒有講清楚@@ 血液是已經處理完成DNA了 昨天重做後
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現是primer加太多
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Primer確定沒有斷掉 謝謝版友回覆！
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