[求救] 請問如何分析ECM的成分？

看板Biotech作者 (玻璃做的大叔)時間7年前 (2017/02/26 13:07), 編輯推噓7(7推 0噓 11→)
留言18則, 7人參與, 最新討論串1/1
請問如果想知道細胞分泌且吸附在材料的ECM種類，應該要如何處理？ 我有種fibroblast或endothelial cell，雖然試過triton+氨水來decellularized， 但後續的進行就很不順利。如果用螢光染，就是一整片訊號，無法確定 是不是背景訊號，也沒有型態可言，而且不同材料，原本背景也不同。 而我用RIPA像是跑western去收下來，定量幾乎定不到，就算種再多盤，但 lysis buffer也會等比例增加，濃度上不去，目前染色也染不到， 想送mass人家至少希望有band位置才能比database。 請問ECM protein的分析，我應該要怎麼處理比較好？ -- "Don't hate the player. Hate the game." 當看到哪個名人賺了大錢，領到高額補助或利息，不要去指責他， 而是要指責那個制度、創造那個制度的人，以及默許那個制度的人。 不然你認為一個人不領18%或是一個人不炒房價，就會改變整體環境嗎？ 還不如改變【修改制度的人】，才能從根源改變一切。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.176.47.36 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1488085640.A.00D.html
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我作WB收到濃度太低的sample 會把sample通過濃縮管提高濃
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度 給你參考
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濃縮管要怎麼選？請問哪家有賣？
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會不會反而卡在管上的反而多？
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google amicon
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mass不能整個sample送嗎
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推
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濃縮管可以選 Millipore or Sartorius 的
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推
02/26 17:40, , 8F
至於會不會吸附在膜上就要去要試用來試試了
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推
02/26 17:48, , 9F
濃縮管有依照目標蛋白的size(KDa)分 所以可能要先對你目
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標蛋白size作了解 才不會收錯 至於會不會卡膜上 這我也不
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清楚ㄟ...但好像有出很小體積的款式 降要卡住也卡少一點><
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找樓上提的那幾家的業務來問問吧~~
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請問ECM....選200kD以上合理嗎？
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這邊貴儀有說不能整管送，如果我會操作或是我可以操作也許
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就不會這麼燒腦筋了
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推
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小量濃縮 有pall/millpore
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推
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比較推 M牌
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推
03/02 20:48, , 18F
pall有eppendorf大小的濃縮管，大一點就15mL tube
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