如何改善蛋白aggregation?

看板Biotech作者 (阿亮)時間7年前 (2017/02/05 20:18), 編輯推噓2(2推 0噓 10→)
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我要純化的蛋白是利用pET21b送入BL21plus去overexpresssion，並利用column去純化大量的蛋白，此蛋白是陰道鞭毛蟲的rubrerythrin蛋白，它是一種鐵離子結合蛋白，大小連同his tag前後的residue，大概24kDa，而實驗目的是要去結出這蛋白的結晶，分析它的結構，不過，最近發現此蛋白可以大量被細菌表現並純化出來，然而在後面置換及濃縮蛋白的過程中，發現此蛋白相當容易arregation，很困擾，因為如果純化蛋白的質及量不好，便會影響後續養晶的成功性，好困惱啊，我只是碩班生，老師就要我解結構???，各位大大，有沒有什麼辦法解決啊～ ----- Sent from JPTT on my Asus ASUS_Z012DA. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 175.96.81.144 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1486297113.A.E51.html
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02/05 21:42, , 1F
本實驗室的研究生也都在解結構，沒什麼。找一下buffer條
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02/05 21:43, , 2F
件、改變induce溫度等等，需不需要additive等等，都試試看
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看原文expression沒有問題 問題在後面處理
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02/05 22:10, , 4F
怎麼換buffer的啊? amicon, dialysis?
02/05 22:10, 4F
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02/06 00:21, , 5F
從破菌開始就可以換了，不一定要死守單一buffer
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從low salt、high salt、super high salt開始，各種添加物
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都行，方法很多，其實搞不好鐵離子加下去就解決了
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推
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推樓上, 如果已知會跟離子結合 可以的話, 有一點比較好
02/06 13:09, 8F
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喔建議要有plan B喔 如果解不出來要有別的東西可以寫
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論文XD
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推
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增加Glycerol的濃度5~10% 或者加長或縮短蛋白長度
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加2-ME或TCEP對某些蛋白也有幫助
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