[求救] 蛋白質透析一直沉澱

看板Biotech作者 (kerber)時間7年前 (2017/01/18 19:36), 7年前編輯推噓4(406)
留言10則, 3人參與, 最新討論串1/1
如題 小弟表現一個蛋白 原本溶於8M urea 進行透析到4M就開始沉澱 到2M 都沉澱差不多了。 用的是PBS+10%甘油+0.1mM EDTA +0.1mM pmsf PH=8的透析液 不把尿素透到0就無法進行下個實驗 有哪裡可以改善嗎?謝謝 ----- Sent from JPTT on my Asus ASUS_T00N. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 223.139.189.111 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1484739390.A.D51.html

01/19 03:45, , 1F
溫度?
01/19 03:45, 1F
4度c

01/19 10:01, , 2F
你的蛋白有雙硫鍵嗎?
01/19 10:01, 2F
有 兩個 ※ 編輯: kerber56 (223.139.157.29), 01/19/2017 22:59:55

01/19 23:12, , 3F
可以試試室溫 有些蛋白怕冷
01/19 23:12, 3F
謝謝您 我會試試 ※ 編輯: kerber56 (223.139.157.29), 01/19/2017 23:48:04 ※ 編輯: kerber56 (223.139.157.29), 01/19/2017 23:48:17

01/20 14:44, , 4F
如果你起始在8M Urea, 請用re folding的概念去處理
01/20 14:44, 4F

01/20 14:44, , 5F
濃度不宜高, 不同分子間雙硫鍵接起來恐怕也不是你要的
01/20 14:44, 5F

01/20 14:46, , 6F
另外,如果是E. coli表現的, 雙硫鍵有很大機會是錯的
01/20 14:46, 6F

01/20 14:47, , 7F
記得多做實驗確認一下. 不然投稿會被戰翻...
01/20 14:47, 7F

01/20 19:15, , 8F
對耶完全忘記你這是refolding
01/20 19:15, 8F

01/20 19:16, , 9F
你如果要做biophysics的話 做refolding真的好嗎?
01/20 19:16, 9F

01/21 17:14, , 10F
有his taq嗎?有的話可以嘗試on column refolding
01/21 17:14, 10F
文章代碼(AID): #1OVrC-rH (Biotech)