[求救] Transfection 的問題

看板Biotech作者 (jia)時間7年前 (2016/12/09 00:52), 編輯推噓1(1推 0噓 17→)
留言18則, 7人參與, 最新討論串1/1
各位 前輩們你們好 小弟最近 有做transfection 把一個 帶有microRNA的plasmid 轉染至癌細胞中,這是實驗室第一次做這類的實驗，然 後有些疑問想問問大家，我使用的是jetPRIME 的藥劑。 我一直有個疑問，reagent：DNA的比例，DNA的單位都是ug，但我的plasmid是用kit的elu tion buffer回溶，如果抽取plasmid濃度不同如：1000ng/ul 或 200ng/ul，假設同樣tra nsfection DNA濃度都是 1ug ，這樣一個加1ul一個是5ul，同樣是轉染1ug一個細胞要再 多承受4ul的elution buffer(plasmid 回溶)，不知道會不會對細胞產生毒性，還是說沒 有差？ 也順便問問各位如果transfection時，plasmid濃度都大概多少？ -- Sent from my Android -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 122.121.14.183 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1481215946.A.2A7.html
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elution buffer一般都是水或Tris buffer阿
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如果擔心,何不用elution buffer調成濃度一致
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我後來就有把濃度調成一樣，當然plasmid抽出來時濃度越
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高越好，代表要加入細胞的體積比較少，但想問問各位 tr
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ansfection前，抽plasmid的濃度都多少 (一直擔心elutio
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n buffer在細胞含量太高 哈哈)
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你就想想水和tris要多少才會造成細胞毒性？
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用 mini 和 midi 抽的就算用同樣的 buff 調成一樣濃度
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，做 transfection 效率也會有差。如果可以盡量都用
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midi 抽到的 DNA 來做。Mini 抽到的通常沒有 midi 純。
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我都調成1ug/ul耶 至多0.5ug/ul~
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我都抽 maxi
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elution buffer會是無菌的嗎？
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會過.22 fil ; kit組附的理論上是 (TE也不太會長東西
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吧
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推
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抽midi or maxi 1ul 2ug 以上 看下多少再調整
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可以fb 搜尋 G葛格的生命科學小教室
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