[求救] HCl泡過後DAPI會沒法染

看板Biotech作者 (玻璃做的大叔)時間7年前 (2016/10/30 18:52), 編輯推噓2(2推 0噓 8→)
留言10則, 6人參與, 最新討論串1/1
我現在在做BrdU的蠟切，protocol中需要HCl去DNA denature， 根據ABCAM，我用2M HCl泡1小時，對照組用PBS。 曝光，沒有泡HCl的強度爆表(4095以上)，泡過得不到200。 這是泡過HCl http://tinyurl.com/hd2usdk http://tinyurl.com/jt62prf 沒泡HCl http://tinyurl.com/zubm3of http://tinyurl.com/zvl3lvu 看來HCl也會破壞DAPI的效果，請問各位染過BrdU蠟切片的，denature條件 都抓多少呢？ -- "Don't hate the player. Hate the game." 當看到哪個名人賺了大錢，領到高額補助或利息，不要去指責他， 而是要指責那個制度、創造那個制度的人，以及默許那個制度的人。 不然你認為一個人不領18%或是一個人不炒房價，就會改變整體環境嗎？ 還不如改變【修改制度的人】，才能從根源改變一切。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.176.37.75 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1477824727.A.1EE.html
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10/30 23:24, , 1F
我怎麼記得DAPI是要卡在dsDNA中
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10/30 23:43, , 2F
可是一般IF也適用HCl去處理，兩個可同時染
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我做過的IF從來沒有用過HCl...
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IF為什麼要用HCl?
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IF沒有吧！？
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若是用EdU做click reaction就不需要HCl
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試試加0.1 M sodium borate pH 8.5, 室溫30分 去中和HCl
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另外，BrdU染色需要denature DNA所以需要HCl
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11/06 19:58, , 9F
不能只有PBS去洗HCl嗎？ABcam也說sodium borate是option，
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11/06 19:58, , 10F
我以為不重要。
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