[求救] 請問BrdU切片染色的hydrolysis條件

看板Biotech作者 (玻璃做的大叔)時間7年前 (2016/10/22 22:36), 編輯推噓0(000)
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我之前細胞染BrdU一開始沒有加HCl,結果抗體都沒染到,螢光都留在細胞質(背景), 之後BSA前室溫2M HCl 10min,螢光就成功出現在核內和DAPI會重合。 現在我改用石蠟切片,HIER用過citrate pH6或TE pH9,煮沸10min,如果沒有 HCl染不上,但是我同樣用2M HCl室溫10min,結果也沒染到。 http://www.abcam.com/protocols/brdu-staining-protocol 我看ABcam protocol,有提到HCl後面接一個Borate Buffer說是 非必要,HCl卻又說有些實驗人員表示也沒必要。確實我看DNA denature的 步驟也有人用高溫解決,所以石蠟切片是HIER順便DNA denature嗎? 還是說切片 HCl要用更重或長時間? -- "Don't hate the player. Hate the game." 當看到哪個名人賺了大錢,領到高額補助或利息,不要去指責他, 而是要指責那個制度、創造那個制度的人,以及默許那個制度的人。 不然你認為一個人不領18%或是一個人不炒房價,就會改變整體環境嗎? 還不如改變【修改制度的人】,才能從根源改變一切。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.176.32.99 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1477146969.A.E31.html
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