[求救] 小鼠腸道組織研磨

看板Biotech作者tynse71864 (TATA box)時間7年前 (2016/10/13 23:00)推噓1(1推 0噓 8→)

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版友們晚安最近要將小鼠的小腸上皮細胞 (IEC) 做均質化之後要上超高速離心分出ER與Golgi 然而最近卡在細胞無法打破的窘境幾乎8~9成的protein都在unbroken pellet中因此來求救均質方法: IEC先以swelling bfr [10mM HEPES +1xPI (protease inh)] 5min 再加入2x的homogenize buffer (10mM HEPES, 150mM sucrose, 0.5mM DTT, 1x PI) 此處我試過用Tight Dounce homogenizer 30次或是30G 針頭 30次磨碎後離心分出pellet 與sup 再取相同比例做western blot (以Calnexin做ER marker/GM130為golgi marker) 大部分蛋白都在pellet中並沒有被打破 [有以Huh7 cell line 當作技術練習一樣的方法下大部分的蛋白都會跑去sup 留在pellet的很少] 希望有類似實驗的版友們能提供些建議了謝謝! PS: 有找過paper 會使用nitrogen cavitation bomb來破細胞但周遭的實驗室都沒有這個儀器... 想請問有人使用過嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 36.228.136.225 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1476370801.A.EBD.html

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sunorange

10/14 20:47, , 1^F

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怕LN會把我要看的胞器都爆開了... ※ 編輯: tynse71864 (36.228.136.225), 10/14/2016 22:36:00

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signo

10/23 01:49, , 2^F

10/23 01:49, 2^F

推

hypocrisyha

10/24 21:09, , 3^F