[求救] 請教石蠟切片破洞問題

看板Biotech作者 (恬)時間7年前 (2016/09/09 12:25), 7年前編輯推噓4(4推 0噓 12→)
留言16則, 5人參與, 最新討論串1/1
大家好 第一次發問 已經搜尋過板上的文章 也google過 想請教大家石蠟包埋切片一直破片的問題 最近發現好像比較大塊一點的檢體或是含有脂肪組織的檢體 都容易破片 而且是一個大洞 像照片裡這樣 https://drive.google.com/file/d/0B3I2jzG2HDoMTHZ6NkEtOTh3bVk/view?usp=sharing 檢體是用10%中性福馬林固定一天 脫水過程(機器Leica TP1020): 梯度酒精(75% >95% >95% >100% > 100% >100%) > xylene >xylene > wax> wax> wax 接著就石蠟包埋 放冰上約20-30分鐘後再進行粗切及細切 有嘗試過 (1)換新刀片切(feather的跟leica的刀片都試過)-->失敗 (2)蠟塊冰久一點-->失敗 (3)3um,4um,5um各種厚度-->失敗 (4)脫水機的酒精跟xylene全部換新-->失敗 想請教大家 是不是還有哪裡可以改進? 謝謝大家指教~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 111.248.171.28 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1473395150.A.813.html ※ 編輯: karine424 (111.248.171.28), 09/09/2016 12:29:13
推
09/09 13:26, , 1F
請問您泡每個梯度酒精,Xylene 和Wax之間的時間多久?
09/09 13:26, 1F
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09/09 13:27, , 2F
看起來像是蠟沒有進到組織裡面
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09/09 13:27, , 3F
或許可以加長每個buffer浸泡的時間看看~
09/09 13:27, 3F
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09/09 14:06, , 4F
每個梯度酒精xylene, wax都是一個小時!
09/09 14:06, 4F
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09/09 14:08, , 5F
請問如果要延長的話,是每一缸時間都加長嗎?30min?1hr?
09/09 14:08, 5F
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09/09 17:02, , 6F
要看你的組織大小調整 一般來說越大要越久
09/09 17:02, 6F
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09/09 17:04, , 7F
然後每個濃度可以增加換的次數 讓buffer可以完全平衡
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推
09/12 06:12, , 8F
最簡單的計算方式, 1mm厚度的檢體要泡1小時,
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09/12 06:15, , 9F
然後, 脂肪多的檢體, 泡蠟over night會有很大的幫助
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09/12 06:15, , 10F
但缺點是其他的部分會變更硬, 尤其是豬皮的部分
09/12 06:15, 10F
推
09/12 08:04, , 11F
1mm厚度的檢體要泡1小時,是指的是泡蠟嗎？之前的脫水步驟
09/12 08:04, 11F
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09/12 08:04, , 12F
正常嗎？
09/12 08:04, 12F
推
09/20 14:52, , 13F
福馬林有問題？
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09/20 14:53, , 14F
Commercial buffer 不是完全沒問題的 被陰過
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10/03 10:34, , 15F
謝謝大家 我把蠟塊再拿去泡蠟2hr 有變比較好切
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10/03 10:35, , 16F
因為有時間壓力 所以只多泡了2hr 太感謝各位高手~
10/03 10:35, 16F
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