[求救] 請問如何動態追蹤細胞是否複製?

看板Biotech作者 (玻璃做的大叔)時間7年前 (2016/08/27 13:59), 編輯推噓7(7012)
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我取了腦組織做培養,primary不會太純,只少astrocyte一定有, 平常都有ARA-C抑制生長,如果沒加的話,過一星期就會看到滿滿的非神經細胞。 現在我觀察到細胞成團,而且會越來越大,所以有兩種可能 1.replication,可能Cytarabine沒能完全抑制 2.migration,就只是旁間零星細胞的聚集 如果用brdU固定染色就只有一個時間點,我想用timelapse追蹤確認 請問哪些辦法,可以持續追蹤一個增大的細胞團是因為複製或別的細胞移動聚集? -- "Don't hate the player. Hate the game." 當看到哪個名人賺了大錢,領到高額補助或利息,不要去指責他, 而是要指責那個制度、創造那個制度的人,以及默許那個制度的人。 不然你認為一個人不領18%或是一個人不炒房價,就會改變整體環境嗎? 還不如改變【修改制度的人】,才能從根源改變一切。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.176.32.99 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1472277599.A.48C.html

08/27 14:33, , 1F
去買一台Lonza的Cytosmart 就可以啦... $$$$
08/27 14:33, 1F

08/27 14:48, , 2F
唉!有錢大家都可以發seience了,說點沒錢的方式吧XD
08/27 14:48, 2F

08/27 14:51, , 3F
你可以用染的,cell tracker, 染了再養,有很多種
08/27 14:51, 3F

08/27 14:52, , 4F
qdot的比較貴,但是如果是replicate的話螢光強度減半
08/27 14:52, 4F

08/27 14:52, , 5F
的趨勢好像比染料的好.
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08/27 15:31, , 6F
若migration的細胞有特定maker 可以染活體螢光看不
08/27 15:31, 6F

08/27 15:31, , 7F
時間 看是否有移動以及細胞團是否有螢光出現?
08/27 15:31, 7F

08/27 16:57, , 8F
timelapse microscopy 直接觀察?
08/27 16:57, 8F

08/27 21:30, , 9F
我們有timelapse,但懸浮球的xyz很難定位,又會旋轉...
08/27 21:30, 9F

08/27 22:39, , 10F
對啊pulse chase的染色 hoechst染核就可以了吧
08/27 22:39, 10F

08/28 00:21, , 11F
不過隨時間不分裂hoechst也會弱掉吧?我應該如何比?
08/28 00:21, 11F

08/28 00:21, , 12F
而且顯微鏡螢光不是最好別定量?
08/28 00:21, 12F

08/28 03:12, , 13F
上flow? 再用fixed又染過的細胞當control
08/28 03:12, 13F

08/28 18:28, , 14F
sorter 分離不同群細胞--> 螢光dye標定特定細胞
08/28 18:28, 14F

08/28 18:28, , 15F
-->再混合回去養-->追蹤螢光分布
08/28 18:28, 15F

08/29 00:13, , 16F
染CFSE這種CellTrace dye,分成實驗組和抑制分裂的
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08/29 00:14, , 17F
control組,收細胞上flow看螢光強度,沒分裂的話螢光強
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08/29 00:15, , 18F
度應該會和control一樣,有分裂就會呈現螢光衰減分佈
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08/29 00:19, , 19F
還可以配合特定marker進行複數染色,區分出不同細胞群
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文章代碼(AID): #1NmInVIC (Biotech)