[求救] 銀染染色問題

看板Biotech作者 (Phoebe)時間7年前 (2016/08/09 18:53), 7年前編輯推噓5(5推 0噓 12→)
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大家好，最近因為做GST pull down而需要用此染色法，我跑完膠先染coomassie blue， 看只有染到GST的蛋白，但看不到interacting protein，所以就接著染銀染，染之前先de stain過了，我們實驗室用的牌子是Bio Rad的，因 為沒經驗所以步驟就照上面走，staining and developing也照上面染了20分鐘，後來才 知道這步驟不能太久，於是我就褪染再重新染一次，在旁邊看才幾秒鍾的時間，還沒看到 band整片就變色了(哭)，就只好報廢重新來過，後來去網路上查資料使用的容器要很乾淨 ，如果克服這個問題，請問銀染過程還需要注意什麼問題呢?謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.72.46 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1470740007.A.C2D.html ※ 編輯: phoebe1620 (140.112.72.46), 08/09/2016 18:54:27 ※ 編輯: phoebe1620 (140.112.72.46), 08/09/2016 19:14:01
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08/09 23:14, , 1F
先照protocol走過一次唄 銀染沒有退了再染的啦
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推
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我是全用滅菌水 東西盡量當天現配 (kit我就不清楚了)
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develop應該是蘇打水溶液 大概等到有顏色(你預期的地
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方)就可以停止了
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盡量跑0.75mm 的薄膠，太厚染的程度會不均
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另外有用 WB確認過interacting protein有被抓下來嗎？
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不然你染了半天沒東西也沒法下結論
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謝謝各位的建議~我的protein是未知的，要做proteinID
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的，所以無法用WB去看
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推
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之後要打 MS的嗎? 那就忽略我最後一行 XD
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容器會全用 detergent洗過
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是的~謝謝你的意見:)
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推
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莊榮輝沒用蘇打，用NaOH耶
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推
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其實就是要鹼性環境，讓HCHO能在鹼性環境中把Ag+還原
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變成 Ag
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推
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我用莊榮輝步驟，泡完Ag+後，泡HCHO的竟然要超過一星期才
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微微變嘿，我還是搞不懂問題在哪。結果只好回去用coomassie
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