[求救] 老化marker beta galactosidase染色

看板Biotech作者 (西哇西)時間8年前 (2016/07/01 16:17), 編輯推噓3(308)
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各位版友好, 我的研究題目與老化相關,所以需要建立體外cell line aging model. 最近卡在 beta-gal 的染色實驗需要各位給我一點意見. 我使用Hydroxyurea還有Etoposide誘導cell line老化, 這兩種藥物都有文獻支持可以在cell line上成功誘導老化並有beta-gal染色positive. 這是我希望得到的結果(from google) http://imgur.com/6eWRR0e
可是我染出來的結果卻不如預期,Control組與藥物組的結果如下圖: Control http://imgur.com/HrYXl3i
Hydroxyurea 600microM 14天 http://imgur.com/fKmjGPt
Etoposide 10microgram/ml 14天 http://imgur.com/QsNOo7F
最近一直盯這看,我都覺得好像有一點點綠色了(自我催眠).... 另外,染色的技術已經用老化的primary cell做過測試,kit也沒問題,都是positive. 可以麻煩各位給我一點意見嗎?我已經不知道怎麼調整比較好了,謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 49.217.176.117 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1467361030.A.ECD.html

07/02 09:10, , 1F
其實慢明顯了,只是你細胞養的太滿了吧
07/02 09:10, 1F

07/02 15:26, , 2F
怎麼倍率不同@@?
07/02 15:26, 2F

07/02 23:01, , 3F
好的我會減少細胞數,另外倍率是一樣的哦,老化的細胞核
07/02 23:01, 3F

07/02 23:01, , 4F
會變大,整個細胞膜攤平
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07/07 02:46, , 5F
1. 細胞數減少。2. PBS Wash x2。 3. 顯微鏡是黃光 減
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07/07 02:46, , 6F
光片拿掉。 可以改善很多
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07/09 21:46, , 7F
反而覺得是control染太深,也許減少染色時間看看...
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07/09 21:47, , 8F
但是你實驗組的細胞明顯比較不健康,可能需要確定是否有死
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07/09 21:48, , 9F
你實驗是誘發細胞老化而非細胞死亡,那些細胞感覺快死了
07/09 21:48, 9F

03/27 23:27, , 10F
好像本來就不太好染
03/27 23:27, 10F

03/27 23:27, , 11F
另外是跟盤子的材質有關,印象中要避開PE還是PP的樣子
03/27 23:27, 11F
文章代碼(AID): #1NTYS6xD (Biotech)