[求救] WB protein ladder 反光

看板Biotech作者 (吱吱)時間8年前 (2016/05/15 12:24), 編輯推噓4(4推 0噓 13→)
留言17則, 5人參與, 最新討論串1/1
大家好，又來請問 WB 的問題， 我同時做 primary antibody incubation 了三張 membrane， antibody 都是 re-used 的前幾次做都沒問題， protein ladder 加的量也都沒變， 但是昨天做的兩張，protein ladder 反白（如圖）。 http://imgur.com/jhDjesJ
請問有沒有人知道這是什麼原因嗎？感謝。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 96.49.200.66 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1463286280.A.03D.html
推
05/15 13:00, , 1F
記得是訊號太強爆掉
05/15 13:00, 1F
→
05/15 14:08, , 2F
爆掉不是右邊全黑的那點嗎？我的如果爆掉在 membrane 上可
05/15 14:08, 2F
→
05/15 14:08, , 3F
以看到焦掉，但顯影會全黑不會反白，protein ladder 從 m
05/15 14:08, 3F
→
05/15 14:08, , 4F
embrane 肉眼看沒焦，不會比右邊那塊黑點訊號強。
05/15 14:08, 4F
推
05/15 14:45, , 5F
你搜尋板上 “反白” ，可能可以找到一些原因
05/15 14:45, 5F
推
05/16 07:58, , 6F
我以前反白也是爆掉 但是你的condition都跟之前一樣吧
05/16 07:58, 6F
→
05/16 19:35, , 7F
unstain ladder? ECL從頭用到尾? Rab? membrane reprobe?
05/16 19:35, 7F
→
05/16 19:36, , 8F
marker不像是燒掉 (反而倒數第二marker位置的band燒掉了?)
05/16 19:36, 8F
→
05/17 01:09, , 9F
我的 condition 跟之前一樣，有一張一起做的沒這種情形。
05/17 01:09, 9F
→
05/17 01:09, , 10F
爆掉是倒數第二大黑點的那個沒錯，marker 應該不是爆掉，
05/17 01:09, 10F
→
05/17 01:09, , 11F
但不知道為什麼會反白。
05/17 01:09, 11F
→
05/17 01:10, , 12F
Marker 是 prestained，ECL 每張 membrane 都有還新的，
05/17 01:10, 12F
→
05/17 01:10, , 13F
不是 reprobe。
05/17 01:10, 13F
推
05/17 16:19, , 14F
ECL下的不夠均勻 累積在那也會這樣
05/17 16:19, 14F
→
05/19 02:36, , 15F
Stripping 完後 reprobe，ladder 的反白消失了，只是我一
05/19 02:36, 15F
→
05/19 02:36, , 16F
直都用同樣的步驟，同樣的方式去泡 ECL，不知道為什麼就這
05/19 02:36, 16F
→
05/19 02:36, , 17F
兩張出現這個問題。@@
05/19 02:36, 17F
‣ 更多 ad1980 的文章
文章代碼(AID): #1ND_e80z (Biotech)