[求救] ELISA做不出來～煩請各位大大指點

看板Biotech作者 (全省吃透透)時間8年前 (2016/03/16 16:09), 編輯推噓3(3推 0噓 17→)
留言20則, 8人參與, 最新討論串1/1
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓， 請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 我的實驗是從空盤開始coating 從過年前試到現在都做不出來 有思考過是不是因為沒有binding上去的問題 從原本的夾心法換成直接先種抗原 還是做不出來 我的抗原是IgG Buffer也是carbonate 和PBS都試過 不知道是不是我在wash時有問題 我通常垂直向下倒 然後well裏沒有液體 不知道這樣有沒有問題 請各位大大救救我～ 手機排版請原諒～ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.55.197 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1458115747.A.247.html
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03/16 16:28, , 1F
還是你coating的時候就出問題了呢?
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做不出來有很多種做不出來 把情況描述清楚
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commercial kit還是自己開發的套組? 用錯盤子? coating buf.
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用甚麼buffer?
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03/16 23:23, , 5F
寫的有點簡略，可以在寫清楚一點嗎
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推
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是repeat不出來？還是Ab根本不認native蛋白？
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03/17 23:09, , 7F
coating buffer 就是試過PBS和carbonate
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盤子是用PS材質的去coating 因為我是要
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用我自己的系統去做顯色來測抗原 所以跟
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一般二抗後面的步驟不太一樣 有試過藥品
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應該沒有問題 我的抗體跟抗原也是同源 所
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以不知道問題出在哪
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推
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可能是藥品壞掉
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推
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很有可能是藥品壞掉+1 特別是protein 我之前就是用了放
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超過三個月的recombinant protein 整個結合力出了大問題
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不過你還是應該詳述一下所謂的"做不出來" 是哪裡做不出
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來、結果呈現什麼情形？
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如果是curve完全無法拉得出來 建議要先做詳細的titrate
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才能確定每一個chemical是在適當的濃度下 否則飽和或未
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到敏感度限制的時候 是完全無法看出curve變化的
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