[求救] PCR問題以及plasmid濃度換算消失

看板Biotech作者Tsuyokunaru時間8年前 (2016/02/14 02:57)推噓1(1推 0噓 7→)

留言8則, 2人參與討論串1/1

大家好　因為我不是生科相關科系的　但是因為實驗會牽涉到PCR 所以有些問題想請教...... 我們一直都是用HBV當TEMPLATE (然後用自行設計的機構跑PCR) 只是最近想複製長片段出現一些問題跑膠後結果是亮在低於100bp的位置@@ (primer是大於400的) 不管是我們的機台還是傳統機台所以推測是我們DNA來源沒有那麼長? 那是PRIMER DIMER嗎? 還有其他可能性嗎? 然後請教相關科系學姊她說可以用plasmid當template 濃度是 0.1mg/ul 這邊我有點不懂...... 因為我們之前都是用例如 10^8 copies/ul 來標記濃度那這樣我要怎麼轉換?? 我查了一下鹼基對平均分子量660/mole 我看到有外國類似知識+的論壇有這個回答 https://goo.gl/K5VpxV 可是 660 x 6 billion = 3.96 pico gram (pg) ??? 不懂這是什麼意思？所以還是想請問有人能淺顯易懂的解說一下嗎QQ 然後更換成這個TEMPLATE後我們的機台還是跑在低於100bp... 傳統就的確在正確位置了這樣是anealing extension 時間不夠?? 還是溫度不夠? 溫度太高? 因為短primer是ok的...... 然後還有一個蠢問題查了一下plasmid 這好像是細菌或酵母菌之類才有的可是HBV 不是病毒嗎@@？因為不是學生物的　　真的不是很懂這塊　　但是還是想要了解基本的麻煩板友多多指教一下！！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 123.194.200.150 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1455389865.A.383.html

推

supray

02/15 18:25, , 1^F

02/15 18:25, 1^F

→

supray

02/15 18:25, , 2^F

02/15 18:25, 2^F

→

supray

02/15 18:25, , 3^F

02/15 18:25, 3^F