[求救] 牛鞏膜細胞primary culture

看板Biotech作者PumpkinHead (PumpkinHead)時間8年前 (2015/12/31 14:59)推噓7(7推 0噓 6→)

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各位大大好，小妹因為實驗需要進行牛鞏膜細胞的primary culture 因為實驗室裡沒有人做過同樣的實驗，所以一直以來小妹都在摸索不過結果一直不是很理想，想請問各位大大是不是有相關的經驗可以分享，拜託拜託>< 小妹感激不盡~~~ 以下是小妹的protocol: 1.準備需處理用器械及容器，清潔並滅菌完成 2.取2個500ml大燒杯(已滅菌)，一個放優碘，一個放PBS+0.05%EDTA 3.將眼球周圍的肉去掉，倒入優碘，浸泡5min 4.在hood裡準備3個dish，將PBS+EDTA倒入燒杯及dish中 5.將眼球移到hood中，浸泡在PBS+EDTA中洗掉優碘 6.用手術刀於角膜上劃一刀，剪下角膜及鞏膜 7.一邊用scraper刮除視網膜及脈絡叢，一邊用PBS+EDTA清洗鞏膜，重複3次 8.浸泡於Dispase II(0.8U)+DMEM(含抗生素，不含血清)，4度C，overnight 9.取出鞏膜，用PBS+EDTA洗三次，同時用scraper刮鞏膜表面 10.剪碎鞏膜，之後用PBS+EDTA wash X3 11.將組織碎塊浸泡於collagenase type II(4mg/ml)+DMEM(含血清)中，37度C，5%CO2 2hr 12.用PBS+EDTA清洗，過濾若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，請務必註明貴實驗室願意設立正式合作或簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.137.85 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1451545143.A.6BD.html

推

caesar0926

01/01 16:04※ 編輯: PumpkinHead (1.160.39.194), 01/02/2016 16:40:23, , 1^F

01/01 16:04※ 編輯: PumpkinHead (1.160.39.194), 01/02/2016 16:40:23, 1^F

過濾之後細胞數不多，甚至沒有，不過在digest過程中，顯微鏡下有看到細胞黏在組織上過濾前我也有稍微pipet一下 ※ 編輯: PumpkinHead (1.160.39.194), 01/02/2016 16:42:37 ※ 編輯: PumpkinHead (1.160.39.194), 01/02/2016 16:46:39

推

LIAR

01/02 22:51, , 2^F

01/02 22:51, 2^F

Bovine scleral fibroblast

推

LIAR

01/02 23:07, , 3^F

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LIAR

01/02 23:08, , 4^F