[討論] competent cell (勝任細胞)

看板Biotech作者 (MichaelHsien)時間8年前 (2015/12/20 18:43), 編輯推噓12(12推 0噓 15→)
留言27則, 15人參與, 最新討論串1/1
最近實驗室在做中研院的CRISPR實驗 中研院建議使用 Invtirogen 的 E.coli Stbl3 strain 來放大他們所提供的 lentiviral vector (plasmid) 因為這類的plasmid在DH5alpha中 會有產量低、甚至發生重組(變異)的問題 但是這一株competent cell，一個反應要價$700元左右 波仕特代理的Endura G10 strain，也要$400元左右 (相較於DH5alpha，一管大概$50元...感覺差很多) 最近實驗室可能會大量使用CRISPR 為了節省老闆的錢... 想起以前大學的時候，會自己做勝任細胞 雖然轉型效率不比市售的好 但是想想 頂多把plasmid加多點，或塗多點菌也是可以吧?? ↑是這樣嗎? XD 我要transform的東西 不是ligation products 而是一般construct好的plasmids 所以轉型效率對我而言可能不是很重要 (這些勝任細胞的genotype/phenogype才是我要的吧...) 還是之後的問題沒有我想像中的單純? XD -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 36.227.168.176 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1450608235.A.D78.html
推
12/20 18:56, , 1F
建議詢問對方吧 不用 dh5a 應該有特殊理由
12/20 18:56, 1F
推
12/20 19:11, , 2F
lenti-vector用DH5alpha會發現很多重組的clones,光挑到
12/20 19:11, 2F
→
12/20 19:12, , 3F
正確的就飽了
12/20 19:12, 3F
推
12/20 22:38, , 4F
建議一定要用 stbl3 系的菌種來做。不過自己做
12/20 22:38, 4F
→
12/20 22:39, , 5F
competent cell 是沒問題的。ligation product
12/20 22:39, 5F
→
12/20 22:39, , 6F
多轉一點就是了。
12/20 22:39, 6F
→
12/20 23:43, , 7F
有做過這隻的勝任細胞 用起來ok der
12/20 23:43, 7F
→
12/21 14:58, , 8F
我個人是用dh5a完全長不出來
12/21 14:58, 8F
→
12/21 20:13, , 9F
為什麼要省老闆的錢 浪費自已的時間？
12/21 20:13, 9F
推
12/21 20:49, , 10F
Sigma好像有一隻沒那麼貴的可以用.
12/21 20:49, 10F
→
12/21 20:50, , 11F
DH5alpha以前用過, 要人品夠好就做得出來XDD
12/21 20:50, 11F
→
12/21 23:27, , 12F
可以拿到菌之後,找台廠代製生產
12/21 23:27, 12F
→
12/21 23:29, , 13F
台灣有幾個廠牌在做quick transform,其中有會幫人代工
12/21 23:29, 13F
推
12/22 10:49, , 14F
用建議的菌會快很多~用DH5alpha也可以做~只是要挑clone
12/22 10:49, 14F
→
12/22 10:49, , 15F
且一路都要送sequence再三確認序列有無突變
12/22 10:49, 15F
推
12/24 16:30, , 16F
1.不用幫老闆省錢，做出對的才是重點
12/24 16:30, 16F
→
12/24 16:32, , 17F
2.DH5alpha要用也可以啦 可是你要多浪費時間跑膠 PCR
12/24 16:32, 17F
→
12/24 16:32, , 18F
時間上一點也不划算啊~~~
12/24 16:32, 18F
推
12/24 21:20, , 19F
別浪費時間了, 把錢花下去就是了.
12/24 21:20, 19F
推
12/25 01:50, , 20F
花錢買時間實際很多
12/25 01:50, 20F
推
12/26 13:57, , 21F
用lentivirus vector backbone 最好建議一定要用stbl2/3
12/26 13:57, 21F
→
12/26 13:57, , 22F
的原因不光光是efficiency 的問題，也要造成transforma
12/26 13:57, 22F
→
12/26 13:57, , 23F
tion mutations！建議還是不要亂換competent cell
12/26 13:57, 23F
推
01/06 12:47, , 24F
可以自己放大 到不要白痴到換strain
01/06 12:47, 24F
推
01/06 12:48, , 25F
lenti或是rosa26都要用這株
01/06 12:48, 25F
→
01/06 12:49, , 26F
有同事沒注意用dh5a卡了很久才問我
01/06 12:49, 26F
推
01/08 12:34, , 27F
NEB也有不錯的 可以參考看看
01/08 12:34, 27F
‣ 更多 michaelhsien 的文章
文章代碼(AID): #1MTePhru (Biotech)