[求救] clone

看板Biotech作者 (Fait votre père)時間8年前 (2015/10/30 04:12), 編輯推噓0(0011)
留言11則, 3人參與, 最新討論串1/1
我想把我的gene接到pflag-cmv-2 Met-Flag peptide sequence-CTT GCG GCC GCG AAT TCA TCG ATA........... ------------------------------------------- MCS 如果用EcoR1(G^AATTC) 去切把我基因接近去 Met-Flag peptide sequence-CTT GCG GCC GCG AAT TC-gene 請問這樣可以嗎 gene自己有start coden 所以會轉入 如果今天flag是在尾端 gene的前端可以隨意選 而尾端必須不能shift否則無法表現flag 可是今天flag在前端 但TC後面如果接上start coden的第一個A 會shift start coden (inframe/frame的問題) 1.假設我這樣接 flag會表現 那gene呢? 是不是就不會表現? 2.還是他自己有start coden 所以promoter開始做 protein 還是會translation 感謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.116.191.121 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1446149543.A.13D.html

10/30 09:39, , 1F
你已經知道1跟2的答案了,既然Flag跟gene的表現不會在同一
10/30 09:39, 1F

10/30 09:41, , 2F
個polypeptide上,這樣做不就是接心酸的
10/30 09:41, 2F

10/30 10:47, , 3F
感謝1f 所以flag 和 我的protein 都會有
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10/30 10:48, , 4F
但用flag antibody 可能就壓不到我protein位子
10/30 10:48, 4F

10/30 10:49, , 5F
也就是IP即使抓得到flag但沒我的protein在上面?
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10/30 11:29, , 6F
你在繞口令,把整個seq進去translation,就知道產物是什麼了
10/30 11:29, 6F

10/30 15:58, , 7F
你幹嘛糾結在這種問題上?會 frame-shift 就應該要重接啊。
10/30 15:58, 7F

10/30 16:00, , 8F
1.那東西就不會是你想像的原來那個,雖然 flag-??? 會存在。
10/30 16:00, 8F

10/30 16:01, , 9F
但能不能撐到被你發現又是另一個問題了,但絕不是你要擔心的
10/30 16:01, 9F

10/30 16:04, , 10F
2.in vitro狀況下有可能會選擇其他ATG而被偵測到,但細胞內
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10/30 16:05, , 11F
的表現,你想看到選擇其他 start codon 的產物,並不容易。
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文章代碼(AID): #1MCdsd4z (Biotech)