[討論] 請問trypsin可以拿到37度水浴槽warm嗎？

看板Biotech作者 (找英文家教)時間8年前 (2015/08/28 23:19), 編輯推噓6(6推 0噓 30→)
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請問trypsin可以拿到37度水浴槽warm嗎？ 我先前的作法(幾乎本實驗室所有人的作法)， 會事先從冰箱把trypsin先擺在常溫5-20分鐘， 先開始繼代步驟， 加了trypsin之後， 會放在incubator 1-5分鐘， 用顯微鏡看有無把細胞打下來。 有時候趕時間， trypsin可能常溫擺個1-2分鐘， 就開始繼代， 但會發現這時候的細胞就不容易打下來。 所以我想既然加入trypsin之後還要擺進去37度的incubator， 那是否可整罐trypsin直接放到37度水浴槽warm一下， 可節省時間， 但想到酵素放到37度， 會不會失去活性。 在此請教各位先進前輩的意見， 謝謝！ PS:有先爬文，看到一篇2006年的寫說他們的實驗室都會把trypsin放到水浴槽 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 210.60.122.151 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1440775149.A.CF5.html
推
08/28 23:28, , 1F
我認為不要放置太久應該是可以，怕酵素自切。
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08/28 23:28, , 2F
雖然我的方法都是同你第一個方法，在warm medium的時
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trypsin放在室溫一起等。
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08/28 23:32, , 4F
怕的話就盡量分裝吧??
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08/29 07:06, , 5F
我很討厭有人放水浴漕,用久了愈來愈沒效,都冰箱出來直接用
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08/29 07:09, , 6F
所以1X 0.05%對一般癌細胞2-5分鐘都可起來
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08/29 07:13, , 7F
10cm用0.7cc,不過應該算trypsin不多加,細胞就直接放進37度
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推
08/29 11:26, , 8F
怕回溫太多次的話 分裝不就好了
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08/29 14:12, , 9F
我實驗室有兩種方法,一種10cm給2cc的trypsin之後，從第
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一盤逐盤吸起來,再放到incubator。第二種10cm dish加入
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1cc trypsin後，直接放入incubator,之後再直接medium中
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和。謝謝c大與L大提供分裝的意見。
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所以大家進culture room直接把少量的trypsin warm，然後
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觀察細胞，觀察完開始做實驗，省掉等trypsin在室溫升溫
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的時間？
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推
08/29 14:52, , 16F
我們實驗室也都會分裝到15cc離心管跟medium一起拿去warm
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08/29 14:52, , 17F
,在用完之前都不會有切不動的情況發生
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推
08/29 15:01, , 18F
我們以往也都是分裝在15mL離心管 跟medium一同回溫
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08/29 19:53, , 19F
我們用50mL Trypsin都放37℃回溫，沒差啊!
08/29 19:53, 19F
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08/29 19:54, , 20F
有些同學忘記，放了幾個小時... 還是可以用XD
08/29 19:54, 20F
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08/29 21:54, , 21F
了解，這樣可以減少trypsin放在室溫回溫的時間，謝謝！
08/29 21:54, 21F
推
08/30 11:59, , 22F
我以前跟某博學的時候他也都是和培養液一起回溫
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08/30 12:00, , 23F
只有PBS是用冰的 說甚麼會讓細胞懸浮得較好...
08/30 12:00, 23F
推
08/30 21:41, , 24F
我trypsin在10cm都用3ml耶？因為怕沒蓋到，1ml不會乾掉嗎？
08/30 21:41, 24F
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08/30 22:35, , 25F
我用兩cc吸掉擺進去,好像還好,拍一下,細胞有飄浮的感覺
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08/31 07:00, , 26F
我跟過的lab都分裝後37回溫，聽說太頻繁會失活，但我沒
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08/31 07:00, , 27F
遇過
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另外我沒遇過冰的任何液體直接加細胞耶，這樣不是會造
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08/31 07:01, , 29F
成stress嗎？
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08/31 09:11, , 30F
為什麼有需要多加trypsin再吸掉才放37度,何不少加就好
08/31 09:11, 30F
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08/31 09:19, , 31F
多數遇不到失活,是因為加多,加2X濃度,又分裝使用
08/31 09:19, 31F
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08/31 09:23, , 32F
我用完借別人常常放37度幾小時以上的,就需要加幾倍用量
08/31 09:23, 32F
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08/31 09:27, , 33F
如果沒遇到效率變差,請在少量的trypsin試試有無覺得差異
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08/31 09:32, , 34F
一般on-dish lyse 10cm用0.5cc就夠了,trypsin也不擔心覆蓋
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08/31 09:38, , 35F
之前好問兄提問medium最小體積,必竟太少體積生長會不穩,
08/31 09:38, 35F
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08/31 09:42, , 36F
但trypsin少加如果OK,也不用一手續把trypsin吸掉才放37度
08/31 09:42, 36F
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