[求救] 關於promoter assay

看板Biotech作者 (席得)時間9年前 (2015/04/21 18:07), 編輯推噓0(0016)
留言16則, 7人參與, 最新討論串1/1
我想請教對repoter assay熟悉的人, 因為我們實驗室要做promoter reporter 如下圖 http://ppt.cc/~qEE 在promoter後面接mCherry的基因 (或是GFP也可以) 然後把promoter置換成我們研究的promoter 之前實驗室有買commerical的plasmid 但可用的切位少之又少 (像是recommend的切位在insert中也有切點) 很多限制 不知道版上有沒有人有推薦的plasmid 前陣子挖了很多資料 但好像很少是可以置換promoter的 plasmid 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.109.183.217 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1429610838.A.E7A.html

04/21 18:59, , 1F
luciferase?
04/21 18:59, 1F

04/21 19:06, , 2F
不是 是想看mCherry or GFP的表現 因為想在照片
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04/21 19:07, , 3F
的形式來看。但luciferase應該只能得到一些量化的值
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04/21 19:08, , 4F
老闆是想看美麗的圖片 哈哈
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04/21 19:27, , 5F
再怎麼麻煩,用site-direct就可以變出你想要的RE site了
04/21 19:27, 5F

04/21 21:56, , 6F
是這樣沒錯,但是是想到有很多切位的話,就可以給
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04/21 21:56, , 7F
之後很多實驗用了
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04/21 23:59, , 8F
其實site-direct之後接MCS進去,就能廣泛使用了阿
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04/22 10:32, , 9F
promoter切掉後做blunt再做t-tailing 做成t vector
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04/22 10:32, , 10F
promoter直接p出來就接進去
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04/22 16:17, , 11F
請問sticky end產生後如何變成blunt end?thx
04/22 16:17, 11F

04/24 02:08, , 12F
用 Gibson Assembly 的方式來製作呢?聽說不需要 RE sites。
04/24 02:08, 12F

04/24 02:09, , 13F
我個人没用過。
04/24 02:09, 13F

04/24 11:29, , 14F
之前用過pGL4,基本上就是MCS接luciferase reporter
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04/24 14:14, , 15F
t4 dna polymerase
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01/05 06:39, , 16F
pDL LacZ
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文章代碼(AID): #1LDY5Mvw (Biotech)