[方法] Bacterial artificial chromosome (BAC)

看板Biotech作者 (阿冠)時間9年前 (2015/02/02 20:56), 9年前編輯推噓1(1推 0噓 7→)
留言8則, 2人參與, 最新討論串1/1
請教各位， 最近可能需要用 BAC 來 clone 100 kb 左右的 genome， 現在手邊只有 DH5alpha 跟 TOP10F' 這兩支菌， 各位用過這兩支菌做 electroporation 嗎? 100 kb 左右的 plasmid 電進去的效率高嗎? 查到 DH5alpha 做 electroporation 好像 plasmid size 上限也只能到 10 kb 左右， 一般建議是用另外一隻 DH10B，比較會吃大 size 的 plasmid。 但手邊的 TOP10 好像跟 DH10B 基因型很相像， 如果 TOP10 就可以用的話，也能省下一筆錢跟時間。 另外，對這兩支菌來說，電壓一般都使用 1800 V 左右嗎? 希望有經驗的前輩們給點意見囉， 謝謝！ orz -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 220.135.246.236 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1422881803.A.52C.html ※ 編輯: shiningspark (220.135.246.236), 02/02/2015 21:54:53
推
02/03 10:28, , 1F
標準是作DH10B沒錯, TOP10也可以, 我都用過, 都沒問題
02/03 10:28, 1F
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02/03 10:28, , 2F
我的BAC 150-200kb都有
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02/03 10:29, , 3F
不過我還不曉得DH5a 吃不下10kb, 因為我試過是可以的, 我的
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construct 30kb, 存在DH5a, 之後再prep也沒問題
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我想只是效率問題吧, 而效率問題根本沒差, 成功有一個clone
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02/03 10:30, , 6F
吃進去, 就可以作stock, 無限放大了
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02/03 12:12, , 7F
謝謝囉, 可能看到 heat shock 的資料才是 10kb 吧
02/03 12:12, 7F
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02/03 12:18, , 8F
沒錯, 總之想辦法把效率提高就是了
02/03 12:18, 8F
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