[求救] in situ 固定時detergent加太少

看板Biotech作者 (吳右手)時間9年前 (2014/12/19 01:06), 9年前編輯推噓1(1推 0噓 5→)
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小弟我在做植物的RNA in situ hybridization 時， 不小心在第一步使用的組織固定液4% paraformaldehyde in PBS溶液中 將Tween 20和Triton X100 兩種detergent誤加成原本建議濃度0.1%濃度的千分之一， 但在抽氣固定的時候有將組織充分抽氣滲透 (抽到60mmHg組織才上浮) 想請問各位先輩的意見，如果detergent濃度加低了會不會對雜合結果造成顯著影響呢? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 1.160.85.28 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1418922378.A.BD8.html ※ 編輯: Gilver (1.160.85.28), 12/19/2014 01:07:32
推
12/19 09:48, , 1F
沒有permabilise你的probe怎麼進的了膜
12/19 09:48, 1F
→
12/23 21:06, , 2F
因為後面還有Protease處理，還會再細胞打洞一次
12/23 21:06, 2F
※ 編輯: Gilver (140.112.52.118), 12/23/2014 21:06:33
→
12/24 00:06, , 3F
如果膜沒破 你protease只吃的到extracellular domain
12/24 00:06, 3F
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12/24 02:35, , 4F
那請問有機會在脫蠟後hybridization前再幫細胞打洞嗎？
12/24 02:35, 4F
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12/24 02:37, , 5F
比如說在4%formaldehyde或PBS的缸裡加入triton之類的
12/24 02:37, 5F
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12/24 22:10, , 6F
你做做看嘛 失敗了就重來嘛 這次就不要搞錯
12/24 22:10, 6F
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