[求救] 如何讓酵素SanDI(KflI)失活!!??

看板Biotech作者shunminhsu (sharkhsu)時間9年前 (2014/11/23 08:08)推噓6(6推 0噓 10→)

留言16則, 10人參與討論串1/1

由於實驗上的需求，所以要用到SanDI及另外一種酵素(非快切)去切質體。但SanDI 剩快切有貨，和老師商量後下訂。但在最近要使用時才發現這隻酵素無法熱失活，說明書上面是建議用phenol/chloroform extraction..不過實驗室裡面並沒有這些藥品，所以想請問各位前輩，是否有其他的辦法使其失活呢? 現在有考慮過使用plasimd的kit純化，但不曉得可不可行..老師也不太確定囧深怕SanDI沒弄乾淨的話，第二支酵素會切不了阿.. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 114.33.254.149 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1416701297.A.D08.html

推

skybreeze

11/23 09:11, , 1^F

11/23 09:11, 1^F

推

Ianthegood

11/23 12:38, , 2^F

11/23 12:38, 2^F

→

nawussica

11/23 12:44, , 3^F

11/23 12:44, 3^F

是的..現在就是擔心對這手法不熟悉，畢竟後面還要再切第二刀。怕第一次弄完，整個濃度會掉光..不夠切第二刀.

推

leptoneta

11/23 14:06, , 4^F

11/23 14:06, 4^F

→

blence

11/23 14:14, , 5^F

11/23 14:14, 5^F

→

blence

11/23 14:17, , 6^F

11/23 14:17, 6^F

感謝blence大熱心回答，但這兩支酵素似乎沒辦法一起double digest.. 至於切完的話，是要做ligation用的..

→

turtle24

11/23 15:26, , 7^F

11/23 15:26, 7^F

推

huuban

11/23 16:33, , 8^F

11/23 16:33, 8^F

→

huuban

11/23 16:34, , 9^F

11/23 16:34, 9^F

※ 編輯: shunminhsu (114.33.254.149), 11/23/2014 17:11:03

→

blence

11/23 17:21, , 10^F

11/23 17:21, 10^F

→

blence

11/23 17:23, , 11^F

11/23 17:23, 11^F

呃..說明書就寫:Optional: Inactivate the enzyme by phenol/chloroform extraction 現在問題卡在不曉得這個步驟是不是必要的..怕酵素如果真的沒失活或拿掉的話會有影響. 因為處理雙切完的plasmid還要用ExoIII下去做反應... ※ 編輯: shunminhsu (114.33.254.149), 11/23/2014 18:36:18

推

Ianthegood

11/23 21:14, , 12^F

11/23 21:14, 12^F

→

Ianthegood

11/23 21:15, , 13^F

11/23 21:15, 13^F

感謝good大的建議..但一個是快切buffer 另一個是普通buffer 這樣可行嗎!? 酵素好貴阿..不太敢亂浪費XD ※ 編輯: shunminhsu (140.123.126.146), 11/24/2014 09:04:45

→

cillion

11/24 21:32, , 14^F