[求救] 用whole blood檢體跑flow
flow新手第一次在此發問
想請問各位前輩,若要分析neutrophil surface marker,
whole blood sample如果自採檢後,放置於冰箱冷藏兩天後才進行實驗
是否會嚴重影響到細胞活性?
最近因為上flow遇到細胞都變成debris的問題,完全無法分析~非常苦惱
作法:
1.將antibody mix好
2.加入100ul whole blood, 4℃ incubation 30 mins
3.加入lysis buffer, RT incubation 12 mins
4.1200rpm 4℃ 5 mins centrifugation, discard supernatant
5.加入1 ml staining buffer wash
6.1200rpm 4℃ 5 mins centrifugation, discard supernatant
7.加入500ul staining buffer, suspension pellet
8.上機
reagent都是BD commercial
最近做flow結果時好時壞,不是很穩定~真的很苦惱啊!
不知道有沒有什麼小罩門可以傳授
非常謝謝大家解惑喔!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 111.243.240.232
※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1416227654.A.2EA.html
※ 編輯: vantis (111.243.240.232), 11/17/2014 20:39:35
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非常謝謝各位回答!
因為目前主要卡在檢體供應端的地方
也就是有時候我拿到檢體的時候已經放置兩天左右
老闆會覺得放一天還做得出來,放到兩天影響會這麼大嗎?
不過從推文看起來,看起影響真的不小!
所以...只好去跟老闆好好談談吧XD
※ 編輯: vantis (111.243.240.232), 11/18/2014 05:16:27
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