[討論] 關於plasmid extraction

看板Biotech作者 (Egg)時間9年前 (2014/11/06 15:14), 編輯推噓7(704)
留言11則, 8人參與, 最新討論串1/1
各位板友大家好, 是這個樣子的, 由於我們實驗室抽plasmid方式有兩種! 一種是傳統的Alkaline lysis method 我們用來做contruction check使用; 另外一種就是用一般commercial kit做~ 我們發現用傳統法抽的濃度用Nano drop 1000測 約莫是用Kit抽濃度的十倍~ 但是跑1% agarose gel時 發現好像Alkaline lysis抽出來的量雖然很高, 但量卻跟實際跑膠的濃度差十倍~ 假設來說已Kit抽出來為基準, 我loading 1000ng(Alkaline lysis)≒ 100ng plasmid(kit) 我們老師以前不是用nano drop 1000 所以老師覺得我們這樣測出來有點點奇怪, 但我們實驗室大家討論很久還是不太知道為什麼? Nano drop 設定上有什麼特別導致這樣方式有差嗎 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 120.126.61.215 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1415258057.A.B5E.html

11/06 15:35, , 1F
傳統方法有用RNaseA處理嘛?
11/06 15:35, 1F

11/06 15:41, , 2F
kit有過resin,應該比較純,濃度則以比跑膠為準
11/06 15:41, 2F

11/06 15:42, , 3F
我用傳統法抽plasmid,為了定序再用kit通resin,濃度也是
11/06 15:42, 3F

11/06 15:43, , 4F
10倍
11/06 15:43, 4F

11/06 18:11, , 5F
只能說 nanodrop不準XD
11/06 18:11, 5F

11/06 21:27, , 6F
直上Qubit
11/06 21:27, 6F

11/08 02:30, , 7F
nanodrop 230nM很高嗎?
11/08 02:30, 7F

11/09 21:02, , 8F
nanodrop不準+1 建議跑膠看
11/09 21:02, 8F

11/14 18:52, , 9F
有加RNase A,我們用kit抽出來band跟跑膠比較像,傳統
11/14 18:52, 9F

11/14 18:53, , 10F
我們也覺得很奇怪
11/14 18:53, 10F

12/03 14:01, , 11F
nanodrop不是很準,用QUBIT 或分光光度計吧
12/03 14:01, 11F
文章代碼(AID): #1KMn_9jU (Biotech)