[求救] Plasmid跑電泳稀釋後位置亂跑??

看板Biotech作者kevinjeng (Mr.Kai)時間9年前 (2014/11/05 14:52)推噓3(3推 0噓 6→)

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小弟本身主要是做病毒研究，最近在進行clone，抽出plasmid、用enzyme digestion切一刀把circular form plasmid切成linear form後跑電泳check有沒有被酵素切到原本因為沒有切的plasmid是用midi kit抽，所以濃度很高，跑電泳時常變成很亮的一坨，所以最近有做20X稀釋後才放下去跑結果發生奇妙的狀況: 沒有稀釋的plasmid位置大致上正確(約11k)，但是20X稀釋的plasmid位置比起沒稀釋的竟然高了一大截，而且幾個sample(相同clone的plasmid)狀況都一模一樣! 除此之外，enzyme digestion product 也很明顯沒有切到(band的位置低於原本plasmid，當然也低於20X稀釋的原plasmid，酵素換過全新的，狀況相同，所以懷疑是plasmid出了問題 enzyme切位在我的plasmid上確定只有一個在poly-A tail上因為以往做類似clone(plasmid大小相同、切位相同、酵素相同)沒有這種情形，不知有沒有大神可以幫助我一下?原本認為這樣一個enzyme digestion是再簡單不過的事情，出這種包讓我現在有點不敢面對老闆與學長姐們...... 謝謝大家~~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.116.63.54 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1415170355.A.DBE.html

推

KittyGod

11/05 15:21, , 1^F

11/05 15:21, 1^F

稀釋跟沒有稀釋的都沒有切，我主要是要看這個酵素有沒有切到，把原本沒切的plasmid做稀釋是想看哪個condition跑電泳看起來比較好看

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KittyGod

11/05 15:22, , 2^F

11/05 15:22, 2^F

推

Bows

11/05 15:24, , 3^F