[討論] 關於細胞Total DNA 萃取的問題

看板Biotech作者 (goodday)時間9年前 (2014/10/25 13:24), 編輯推噓1(107)
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gDNA 或是Total DNA 萃取, 如果是用Kit 抽可以得到很漂亮的singale band (約位在1kb marker 所有band 之上) 然後拉出微弱的smear 到下面。 最近我試了幾種buffer 用Phenol/Chloroform 萃取, 有的情況DNA smear: 大約從2kb 拉到底下的smear 有的情況是DNA 完全 degrade: 約在200bp 左右出現大坨band 想請教的是: 1. 為什麼用kit 抽出來是很漂亮的single band? 是因為gDNA 太大所以擠成一條band 嗎? 2. 若DNA 萃取樣品主要呈現Smear, 表示protocol 不好,萃取失敗嗎? 先感謝分享指教 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.109.32.9 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1414214692.A.F69.html

10/25 14:53, , 1F
用Kit不加RNaseA抽 有時低bp處也會有大駝band
10/25 14:53, 1F

10/27 01:00, , 2F
用p/c/i抽如果不要傷得太嚴重也不太會smear
10/27 01:00, 2F

10/27 01:00, , 3F
integrity吧
10/27 01:00, 3F

10/27 23:38, , 4F
好像有些 Kit 上有註明 kit 抽出來的 DNA 是 30~50 kb
10/27 23:38, 4F

10/27 23:38, , 5F
的片段?
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10/29 04:35, , 6F
QIAGEN 的 DNeasy 抽出來主要是 30 kb, 但 up to 50
10/29 04:35, 6F

10/29 04:36, , 7F
kb, 一般分析都可以用,如果要 > 50 kb 就要另外挑
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10/29 04:37, , 8F
kit 或是 ethanol (isopropanol) 沉澱小心抽了
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文章代碼(AID): #1KIpGazf (Biotech)