[求救] Gateway cloning

看板Biotech作者 (平行線上的交集....)時間9年前 (2014/10/05 01:35), 編輯推噓0(0013)
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大家好, 我之前做 cloning 都是用 restriction enzyme 剪接法, 但是因為這次的 target vector 只能用 gateway, 所以第一次使用這個方法。 在 invitrogen 的 manual 裡面建議, pENTR vector 要用他們的 PureLink™ HiPure Plasmid Midiprep Kit 純化。 而且不建議使用 Mini-prep (alkaline lysis)。 但是我看了這套 HiPure 的 manual, 裡面也是 alkaline lysis,只是不是用 spin column 而已。 請問各位使用過 Gateway® LR Clonase II + Enzyme Mix 的版友, 我一定要換純化 vector 的 kit 嗎? 謝謝 m(_ _)m -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 134.84.54.178 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1412444126.A.D5E.html

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只是建議用他們自家產品而已,沒有說不適合用其他miniprep
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10/05 03:52, , 2F
genemark, viogene的miniprep用過也都ok
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10/05 04:16, , 3F
就我的經驗用其他牌也可以做 gateway 影響應該不大
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10/05 08:25, , 4F
感謝樓上兩位~
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另外請問,如果我的 insert 是 pENTR 的兩倍大,
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我還是用他建議的 insert:vector = 0.5-2:1 嗎?
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還是應該反過來?
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I:V=0.5~2:1,你把兩者反過來不是也是0.5~2:1?
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是分子量不是重量喔
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喔不好意思,我沒說清楚,我是手冊上寫 molar ratio
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b 大真是一語驚醒夢中人~
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不過因為 pENTR 我都加 1 uL,所以是調整 i 的量
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所以沒想清楚 @ @
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文章代碼(AID): #1KC2_UrU (Biotech)