[討論] SDS-PAGE有可能denature不完全嗎?

看板Biotech作者 (玻璃做的大叔)時間9年前 (2014/09/21 19:57), 編輯推噓0(009)
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我用的western是denatured的,sample buffer的SDS是1%,最近跑TGFβ2發現50kD 有表現以外,100kD附近也有很強的訊號。 由於抗體是polyclone,當然無法排除認錯,不過考慮分子量和強度,附近又很乾淨, 我有點懷疑是dimer。 不過我不懂的是既然已經用過SDS和β-me,請問這樣dimer有可能解不開嗎? dimer應該算第四級結構吧?可是SDS和β-me不是可以解到1級結構嗎? -- 起初,他們追殺共產主義者,我沒有說話,因為我不是共產主義者; 接著,他們追殺猶太人,我沒有說話,因為我不是猶太人; 後來,他們追殺工會成員,我沒有說話,因為我不是工會成員; 此後,他們追殺天主教徒,我沒有說話,因為我是新教教徒; 最後,他們奔我而來,卻再也沒有人站起來為我說話了。 《First They Came(他們首次來時)》,Martin Niemoller牧師(1892-1984) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.176.38.58 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1411300625.A.D77.html

09/21 21:49, , 1F
這種情況我們實驗室通常看預期分子量的band就好
09/21 21:49, 1F

09/21 21:50, , 2F
polyclone的通常會有較多的雜band
09/21 21:50, 2F

09/21 21:50, , 3F
如果dimer是公價鍵結才有可能不會被解開
09/21 21:50, 3F

09/21 21:51, , 4F
但若沒有加CROSSLINKER一般非共價鍵結識會被解開的
09/21 21:51, 4F

09/21 21:52, , 5F
以上個人認知 有錯請糾正!!!
09/21 21:52, 5F

09/21 22:02, , 6F
加熱與否會有影響嗎?
09/21 22:02, 6F

09/21 23:45, , 7F
或是S=S,先前看過有paper加50?mM DTT才把高MW拉回正常位置
09/21 23:45, 7F

09/22 00:54, , 8F
我加入sample buffer後,SDS=1%,β-me=5%,不會換算XD
09/22 00:54, 8F

09/25 11:26, , 9F
還是有可能 真的要就做alkylation看看吧
09/25 11:26, 9F
文章代碼(AID): #1K7hqHrt (Biotech)