[求救] 有關於酒精回收失敗的因素

看板Biotech作者 (帶螞蟻散步)時間9年前 (2014/08/26 01:21), 編輯推噓1(1推 0噓 12→)
留言13則, 7人參與, 最新討論串1/1
各位研究生好 最近我有在做酵素截切DNA的切膠回收 但最近在做酒精回收卻出現匪夷所思的問題想各位請教 ================================================= 酵素雙截切後跑膠有出現我要的band 加入3倍體積99.5%酒精和1/10體積的3M NaOAc 搖晃時溶液內有出現絲狀現象 -20度冷藏1小時以上後4度 12K轉速 10min 有出現白色固體沉澱 70%酒精wash過後也還在 再加水(20ul)回收前還確定pellet還在 也親眼見到pellet回溶於水中 但是跑膠卻沒出現band 測DNA值也非常的差 請問是哪個步驟有問題?或是需要多加哪個步驟比較好? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.120.130.231 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1408987316.A.85D.html
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08/26 10:24, , 1F
以前有做過嗎
08/26 10:24, 1F
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08/26 18:44, , 2F
之前常做 通常有出現PELLET時 DNA量跟品質都不會太低
08/26 18:44, 2F
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08/26 18:45, , 3F
但是有時卻出現有PELLET 但回溶後值都很低的狀況
08/26 18:45, 3F
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08/26 23:54, , 4F
用什麼回收
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08/28 01:01, , 5F
先加酒精還是NaOAc
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08/28 13:25, , 6F
如果要產量 -20就擺o/n
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08/28 13:25, , 7F
離心60min+
08/28 13:25, 7F
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08/29 21:46, , 8F
可能水髒了，改用TE(10,1)回溶～
08/29 21:46, 8F
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09/02 19:45, , 9F
片段SIZE多大?
09/02 19:45, 9F
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09/03 11:56, , 10F
電泳回收+酒精沉澱(先加NaOAc)
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09/03 11:56, , 11F
500bp以下
09/03 11:56, 11F
推
09/11 21:54, , 12F
如果沒有要直接往下做不要用水吧
09/11 21:54, 12F
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09/29 00:25, , 13F
你是在做切膠回收,還是剩餘DNA樣品回收??
09/29 00:25, 13F
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