[求救] 膜蛋白用一般SDS PAGE跑

看板Biotech作者 (ED)時間10年前 (2014/07/01 04:32), 編輯推噓8(8推 0噓 5→)
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正常養菌過夜，5ml的菌液IPTG誘導表現後，直接波音波破菌約5分鐘， 打一秒停一秒，後以10000 rpm於4℃離心15分鐘，用300μl PBS回溶 拿30~50ul跑SDS PAGE，跑出來可以看出有表現!!該怎麼解釋?? 一般膜蛋白有可能這樣就出現嗎??序列分析出是GPI-AP!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 123.195.12.212 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1404160341.A.07C.html
推
07/01 09:29, , 1F
10000轉離心15分就有膜蛋白真的有點神
07/01 09:29, 1F
推
07/01 09:51, , 2F
不是用IPTG去induction了?還是你覺得這東西會出現在
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細菌表面?
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07/01 11:29, , 4F
膜蛋白應該要特別去分層才會分得開 一般操作都是混在一起
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07/02 14:18, , 5F
inclusion body? 不過應該不溶PBS才是
07/02 14:18, 5F
推
07/02 16:41, , 6F
膜蛋白因為transmembrane部分是疏水性,所以需要detergent
07/02 16:41, 6F
推
07/02 17:10, , 7F
幫助才能從inclusion body中拉出,不然會全卡在well上
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07/02 17:10, , 8F
至於要哪種detergent則要試
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推
07/02 17:26, , 9F
用波音波應該也打不出 你應該也需要detergent SLS?
07/02 17:26, 9F
推
07/02 19:18, , 10F
之前看學姐做是用microfluidizer破菌的
07/02 19:18, 10F
推
07/09 09:59, , 11F
上清液有跑嗎? 如果沒意外的話上清應該也會壓到 band
07/09 09:59, 11F
推
07/09 10:15, , 12F
如果沒有的話，那 PBS 回溶的那部分是 inclusion body
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的機會比較高。
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