[求救] 關於病毒顆粒製作電子顯微鏡的問題
大家好
我們實驗室想要證明我們的純化技術良好 因此想要利用電子顯微鏡的方式觀看病毒顆粒
但是結果一直不太漂亮
顆粒的純化是先利用超高速離心沉澱後 再利用非連續蔗糖梯度分離
並用西方點墨法分析哪些部分有病毒顆粒存在
負染的部分
利用鍍膜的銅片將病毒顆粒吸附後 染醋酸鈾結束後乾燥就上機
病毒顆粒不明顯就算了 背景也很容易有髒汙
我們做的是Epstein-Barr virus 別人做的負染也是看起來爛爛的 所以放棄....
包埋超薄切片的部分
我們利用抗體+Agarose beads先將病毒顆粒沉澱 然後一起脫水與包埋後切片
切下來的片子再利用抗體進行標定 得到的結果較滿意 但病毒的濃度讓人不滿意
因為太少 所以老闆也就質疑....一直說不像= =
考慮到抗體-病毒的作用會損失不少的病毒顆粒
所以我想更改固定病毒pellet的方法
我有看過有人利用Low-melting agarose進行樣本的包埋後再進行電顯脫水包埋與切片
目前我的想法是得到病毒的pellet以後
加入 10~20 lambda的 2% low-melting agarose將樣本固定在底部
之後再進行樣本固定與脫水等電顯步驟
應該能有效提高病毒顆粒的濃度 會讓切片比較好切到目標
但這種方法的示範影片是固定植物的根還有線蟲
不知道是否有人聽說過用來做病毒顆粒或細胞?
如果有人有做過類似的實驗也請分享經驗> <
--
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 1.160.112.140
※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1403214378.A.F4A.html
※ 編輯: joseph103331 (1.160.112.140), 06/20/2014 05:48:31