[求救] [IHC]脫水步驟中的甲醇為何不會傷害抗原

看板Biotech作者 (黑輪桑~ YO)時間10年前 (2014/05/22 22:30), 編輯推噓2(2010)
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各位前輩們好,我是新手上路的碩一新生 最近再做IHC(immunohistochemistry)相關的實驗 老師考我一個問題,IHC步驟中的脫水(dehydration)會不會 破壞(或是使變性)細胞中的蛋白質或某些抗原,我知道答案應該是不會 不然我們做IHC實驗就不會用methanol來脫水了 但我google了很久,都找不到相關資料(只有說可以放心使用methanol來脫水) 到底為什麼methanol不會害蛋白質等物質變性呢? ps: 我們所操作的model是斑馬魚,目的是要標記體內的huC/D蛋白 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 163.25.118.181 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1400769040.A.3EA.html

05/22 23:01, , 1F
從IHC的原理去找答案
05/22 23:01, 1F

05/23 16:59, , 2F
應該是會吧,只是antibody挑可以抓denatured protein的
05/23 16:59, 2F

05/23 17:00, , 3F
05/23 17:00, 3F

05/23 17:42, , 4F
感謝1F和2F連結,回去後仔細讀看看
05/23 17:42, 4F

05/27 22:43, , 5F
找到答案了,但和所給的連結沒什麼關係... 重點是IHC步驟
05/27 22:43, 5F

05/27 22:43, , 6F
中做的PFA fixation就有避免甲醇使蛋白變性的效果
05/27 22:43, 6F

05/28 15:42, , 7F
連結就有提PFA fixation可能造成變性啦...已經變性當然就
05/28 15:42, 7F

05/28 15:43, , 8F
不怕methanol了
05/28 15:43, 8F

06/17 15:59, , 9F
沒想到你回了XD
06/17 15:59, 9F

06/17 16:00, , 10F
有點不懂,PFA應該不會造成變性吧?連結失效了所以我沒辦
06/17 16:00, 10F

06/17 16:01, , 11F
法再次看,你說PFA造成變性 ,那要binding的抗體不就無法
06/17 16:01, 11F

06/17 16:01, , 12F
結合上去了?
06/17 16:01, 12F
文章代碼(AID): #1JVWeGFg (Biotech)