[討論] 有人使用過Takara LA polymerase嗎?

看板Biotech作者 (何鎧)時間10年前 (2014/05/06 11:25), 編輯推噓5(5推 0噓 11→)
留言16則, 9人參與, 最新討論串1/1
小弟最近操作clone時，使用號稱highly-fidelity的Takara LA pol. 但挑8個clone送定序後發現，許多都有point mutation，而且突變的點 都不一樣，大多突變成G/C。 不曉得有沒有人遇過類似的問題？ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 211.76.246.8 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1399346724.A.429.html
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05/06 12:41, , 1F
先前用這支發現如果是cDNA約1~2k大的,不太會有mutation
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05/06 12:43, , 2F
反倒是拿plasmid量有10ng以上去PCR,連500bp也一直突變
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05/06 13:02, , 3F
clone的話是你的菌有問題吧 pol出問題的機率小
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05/06 14:22, , 4F
High Fidelity Polymerase 唯一推薦 Phusion！
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05/06 14:23, , 5F
自己和實驗室夥伴用過後都說讚wwwwww
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05/06 14:24, , 6F
好奇問一下你的 PCR template 來源是什麼？產物多大？
05/06 14:24, 6F
推
05/06 16:51, , 7F
這隻酵素 8年當碩士生時就在用了~~~~~~~~~~超爛 換KAPA吧
05/06 16:51, 7F
推
05/06 17:15, , 8F
給你一個combo.. 用Roche probemaster 再用 Roche HF 威
05/06 17:15, 8F
推
05/06 19:25, , 9F
Phusion蠻貴的但是很好用~XD
05/06 19:25, 9F
推
05/07 13:51, , 10F
用KAPA的hifi P個2.3k都OK 試過1.3k 25+25cycle 也OK
05/07 13:51, 10F
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05/07 13:52, , 11F
微晶代理的樣子 可以 A sample
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05/10 23:17, , 12F
blen或許我們的狀況是類似的, 但我只做過這個cDNA
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05/10 23:18, , 13F
產物約300bp, template來源是plasmid(100ng->50X dilu)
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05/10 23:19, , 14F
所以大家共同的結論, 讓我決定不再買Takara了..
05/10 23:19, 14F
推
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推 pfu ULTRA II 怕太貴可以減量然後補 taq
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05/13 22:49, , 16F
我們做突變或選殖 p 10K全質體都沒問題
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