[求救] 小鼠組織抽RNA都抽不到

看板Biotech作者 (瘋狂恰吉)時間10年前 (2014/02/13 13:25), 編輯推噓4(4推 0噓 11→)
留言15則, 8人參與, 最新討論串1/1
我拿小鼠肌肉組織來抽RNA過程如下 將組織放置研缽(已放在冰上並用液態氮冰過)壓碎後加入trizol 1ml 研磨到trizol回復到液狀蒐集到離心管加入200uL chloroform 10min 離心(低溫) 15min取上清液 加入等量isopropanol後室溫作用30min 離心(低溫) 15min吸掉上清液 加入1ml 75%酒精(DEPEC 水配置) wash pellet(只有沖起來沒有打散) 離心(低溫)後放室溫15min dry 用DEPEC水回溶50uL 我的問題是 1.我測RNA濃度 280/260比值介在1.6~1.7而260/230卻只有0.5... 我詢問抽過RNA的學長他說260/230要在1.5以上才好 2.我的組織已經放在-80冰箱半年這樣會有影響嗎?? 我抽了3.4次了沒一次成功....T^T -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.107.58.150
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02/13 13:52, , 1F
260/230過低應該是吸到chloroform?
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我抽RNA濃度只有50ng/uL左右,最多才117ng/uL
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可是我沒有吸到最底還有殘留液體在分層那階段耶
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+CHLOROFORM後的離心不要在低溫做試試看
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我加入chloroform是室溫作用10分鐘在低溫離心
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推
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磨完我會給他一次forzen-thaw cycle才做後續extraction
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喔~我看懂你的意思了,誤會誤會抱歉
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h大的意思是再加入液態氮在冷凍一次在磨一次的意思
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加chloroform之後有沒有搖阿?
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有,只有上下搖幾下沒有vortex
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抽完再酒精沉澱一次？
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推
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你的問題是抽不到RNA，還是抽得到但是純度差？
02/13 21:06, 12F
推
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建議google Qiagen Fibrous Tissue RNA extration kit
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肌肉這種fibrous tissue不容易取RNA
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推
02/16 11:41, , 15F
肌肉ＲＮＡ少,建議提高組織量
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